[发明专利]一种用于弓形虫感染预防的疫苗和制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学和分子生物学领域，具体地，涉及一种用于弓形虫感染预防的疫苗。

背景技术

弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种呈世界性分布的专性细胞内寄生原虫，具有十分广泛的宿主范围，能感染包括人类在内的几乎所有的所有温血动物。该病原能够通过先天性或获得性途径感染宿主，绝大多数感染为隐性感染，并不表现出明显的临床症状；但对于恶性肿瘤、器官移植及艾滋病患者等免疫抑制及免疫缺陷人群却是主要的致死病因。

在人类感染群体中，孕妇的发病率较高，且危害严重。弓形虫可通过胎盘屏障垂直传播给胎儿，常引起早产、流产、畸胎、死胎等不良症状，而且存活的胎儿也常伴有先天性疾病，如：智力障碍、弓形虫性脑膜脑炎、中枢神经系统损伤和/或弓形虫眼病等。在畜禽感染群体中，弓形虫感染可引起体温升高、腹泻等症状，严重时可导致母畜早产、流产或死胎，并能和其他病原微生物协同作用，造成严重的公共安全问题并会给畜牧业生产带来巨大的经济损失，因此防控弓形虫病已刻不容缓。由于在临床上常用的磺胺、嘧啶类药物防治弓形虫病时对人和动物的毒副作用较大，且容易复发，不能杀死包囊，并往往形成药物残留等问题，因此疫苗防治弓形虫病成为控制该病流行最有效的措施之一。因DNA疫苗可诱发机体全身性的细胞和体液免疫应答而成为抗弓形虫疫苗研究的热点，而且这种有效的体液免疫免疫应答产生的特异性抗体，CD4+依赖的辅助性T淋巴细胞反应和CD8+依赖的细胞毒性T淋巴细胞应答是在抗弓形虫感染动物模型中的重要因素。

目前，国内外学者对弓形虫DNA疫苗的研究主要集中于一些与弓形虫入侵宿主和致病毒力因子上，如：弓形虫棒状体蛋白（rhoptry protein，ROP）包括ROP1和ROP2，ROP18，ROP16，和RON4等，致密颗粒抗原（dense granules antige，GRA）包括GRA4，GRA6和GRA7等，微线体蛋白（microneme protein，MIC）包括MIC4，MIC8和MIC6等，以及膜表面抗原（surface antige，SAG）如：SAG1等。通过对这些疫苗候选抗原进行的免疫保护性的探索研究表明，它们都具有免疫原性并能诱导产生细胞和体液免疫应答以抵抗弓形虫的攻击感染，具有一定的免疫保护力，但是并没有达到所期望的完全保护性效果。究其原因，由于弓形虫生活史复杂，形态多样，宿主范围广泛，不同性质的抗原其免疫原也不同，而其包囊和速殖子的致病机制也存在差异，虽然能找到各种不同的单一抗原成分为基础的疫苗候选抗原，但是由于其含有的淋巴细胞结合位点少、受机体主要组织相容性复合体（Major histocompatibility complex，MHC）限制性大，而难以形成有效的抵抗力对抗弓形虫不同形态的攻击感染。因此仅靠这些少数的候选抗原基因也很难达到理想的效果，而找到更多的，更好的来源于不同弓形虫阶段的DNA疫苗候选抗原，尤其是与弓形虫毒力相关的抗原基因是研究抗弓形虫疫苗的一个重要途径。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于弓形虫感染预防的疫苗和制备方法及其应用。

热休克蛋白，通常又称为热应激蛋白，是生物体在不利的环境因素刺激下应激合成的一组特殊的蛋白质，在免疫系统中扮演分子伴侣角色，在抗原经典递呈与交叉递呈途径、巨噬细胞与淋巴细胞的活化以及树突状细胞的活化成熟中发挥重要作用。HSP蛋白家族成员参与弓形虫的多个生物学过程，是其重要的毒力因子。弓形虫热休克蛋白60（heat shock protein60，TgHSP60）是热休克蛋白60亚家族的一员。该蛋白高度保守，定位于弓形虫的线粒体中，是宿主抗原递呈细胞活化的信号，能够诱导宿主细胞因子的释放和刺激免疫应答的产生，且具有分子伴侣的作用，而且可通过Toll样受体4（Toll-like receptor4）介导宿主的先天性免疫应答以及细胞因子的释放。因此，弓形虫HSP60有望成为理想的疫苗候选抗原。

本发明提供一种用于弓形虫感染预防的核苷酸序列，其含有选自以下的核苷酸序列：

1）序列表中SEQ ID No.1中所示的核苷酸序列；

2）与1）中所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列；

3）对上述1）或2）所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰，并具有弓形虫感染预防功能的核苷酸序列。

本发明的第二个目的是提供一种重组蛋白，其氨基酸序列由权利要求1所述的核苷酸序列编码。

优选地，所述重组蛋白的氨基酸序列参见序列表中SEQ ID No.2。