[发明专利]人前列腺癌细胞及其原代分离培养和传代培养方法与用途

权利要求书

1.一种人前列腺癌细胞，其特征在于, 命名为人前列腺癌细胞HPCC/HL-002，保藏编号为CCTCC NO：C2013102。

2.根据权利要求1所述的人前列腺癌细胞，其特征在于, 染色体为46+1，X,Y，短串联重复序列基因型以16个短串联重复序列基因座/等位基因长度来表示：AMEL/X/Y，CSF1PO/10/12, D13S317/12/14, D16S539/11/12, D18S51/12/15, D19S433/14/17.2，D21S11/29/30，D2S1338/18/25，D3S1358/17/18， D5S818/9/12，D7S820/9/11，D8S1179/12/13，FGA/18/26，TH01/6/9.3， TPOX/9/11，VWA/14/17。

3.权利要求1或2所述的人前列腺癌细胞的原代分离培养方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）收集前列腺癌患者手术切除的癌组织样品；

（2）用95～100%的乙醇洗分离的组织样品，再用PBS洗，然后将组织样品放入含预冷PBS的无菌培养皿中，在解剖显微镜下，用解剖镊子和剪刀去除组织样品中残留的脂肪；

（3）将组织样品用消化液消化；所述的消化液为含胶原酶和分散酶的 HL培养基；

（4）消化后的组织离心去上清，将细胞沉淀重悬于0.25%胰酶-EDTA中消化；

（5）加入含10% 胎牛血清的DMEM培养基，离心去上清；

（6）加入温水浴的分散酶和DNase I，用枪头反复吹打样品；

（7）再加入含10% 胎牛血清的DMEM培养基，用40～70μm孔径的过滤器过滤细胞悬液，收集过滤后的细胞悬液，离心去上清；

（8）重悬细胞沉淀于HL培养基中，接种于培养瓶培养，得到人前列腺癌细胞。

4.根据权利要求3所述的人前列腺癌细胞的原代分离培养方法，其特征在于：

步骤（2）中所述的预冷为在冰上预冷；

步骤（3）中所述的消化液的用量为10倍于组织样品体积，所述的消化的条件为37℃消化1～3小时；

步骤（3）中所述的胶原酶和分散酶的浓度均为0.2 mg/mL。

5.根据权利要求3所述的人前列腺癌细胞的原代分离培养方法，其特征在于：

步骤（4）中所述的消化为冰上消化1小时或室温消化10分钟；

步骤（6）中所述的温水浴为37℃的温水浴；

步骤（8）中所述的培养的条件为37℃、5% CO₂。

6.根据权利要求3所述的人前列腺癌细胞的原代分离培养方法，其特征在于：

步骤（4）、（5）、（7）中所述的离心为1000rpm离心5分钟。

7.权利要求1或2所述的人前列腺癌细胞的传代培养方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）当人前列腺癌细胞增殖至70～90%丰度时，用PBS洗涤细胞，再用0.05%胰酶-EDTA消化单层细胞；

（2）加入DMEM中和消化反应；离心去上清，用HL培养基重悬细胞沉淀，接种于培养瓶培养。

8.根据权利要求7所述的人前列腺癌细胞的传代培养方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的消化的时间为2～5分钟；

步骤（2）中所述的离心为1000rpm离心5分钟，所述的培养的条件为37℃、5% CO₂。

9.权利要求1或2所述的人前列腺癌细胞可用于前列腺癌的发病机理、侵袭和转移的分子机制研究，以及体外筛选抗癌药物的药效学研究和检测。