[发明专利]人前列腺癌细胞及其原代分离培养和传代培养方法与用途

说明书

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，涉及一种人前列腺癌细胞及其原代分离培养和传代培养方法与用途。 

背景技术

体外肿瘤细胞系的建立是筛选肿瘤靶向药物的基本手段。但是目前国内外基础研究和临床应用上，几乎所有的肿瘤细胞系都不是原发位点癌细胞系，多为高度分化和转移的肿瘤来源，不能反映和代表真正原发位点的肿瘤生物学特性。现阶段世界上所使用的近千余种癌细胞株已在体外培养传代数年甚至数十年，它们已不能反映癌症患者体内癌细胞的特性，有的细胞株50％的基因以上都发生了变异，一些实验室还存在大量癌细胞株的交叉污染(Drexler, H.G. et al, Leukemia 1999(13):1601–7; Drexler, H.G. et al，Blood 2001（98）：3495–6；Cabrera, C.M. et al，Cytotechnology 2006（51）：45–50)。而对于不同的个体，即使同一类型的肿瘤也可能由不同的原因或机制所导致，因此对于每一种肿瘤，都需要有能代表其特定发病机制的细胞株来进行新药研发。但是目前的国内外现有技术，从患者癌组织获得稳定的体外培养细胞极其困难，全世界90％以上的肿瘤研究和几乎所有抗癌新药的研究，还在继续使用着可能根本没有代表性的癌细胞株。肿瘤生物学领域目前面临的最大挑战，就是如何从原发肿瘤分离培养出稳定的肿瘤细胞系。 

前列腺癌是威胁男性健康的最常见恶性肿瘤之一，在欧美国家有较高的发病率。我国一直被认为是前列腺癌的低发国家，但随着我国老龄化社会进程加快，以及人们生活水平的提高和饮食结构的改变，目前前列腺癌在我国已成为常见恶性肿瘤，且有发病年龄年轻化的趋势。由于前列腺癌早期无症状，且具有高转移性，这给前列腺癌的诊断和治疗带来极大困难。而前列腺癌细胞系是公认的在体外极难培养和建系的细胞类型。迄今为止，前列腺癌的研究领域根本没有人类原发前列腺癌的细胞系，仅有的细胞系 (LnCAP, PC-3, DU-145) 都是来自转移后的肿瘤组织。尽管国内外研究尝试通过遗传操作，如转入病毒（SV40 T或HPV16E6E7）或细胞癌基因，来延长细胞在体外存活的代数。然而遗传操作会改变这些细胞的遗传背景和表型，如 p53 和pRB信号通路常常被抑制，因此以这种转入基因的细胞为模型，会导致肿瘤研究和抗癌新药研究从根本上走入歧途。 

如果能从原发前列腺癌分离培养出体外稳定传代且未转入外源基因的人前列腺癌细胞，将使人们能够真正地开始研究原发前列腺癌细胞的生物学特性和遗传调控机制，在此基础上揭示前列腺癌的发病机理、侵袭和转移的分子机制，以及体外筛选抗癌药物的药效学研究和检测，这些都将对基础和临床医学研究与应用具有重大意义。 

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种人前列腺癌细胞。该细胞分离培养自临床病人的前列腺癌组织，该细胞未导入任何外源基因，染色体核型为46+1，X,Y；基因分型鉴定为国内外从未登记注册过的一种人前列腺癌细胞系。 

本发明的另一目的在于提供上述人前列腺癌细胞的原代分离培养方法。 

本发明的再一目的在于提供上述人前列腺癌细胞的传代培养方法。 

本发明的目的还在于提供上述人前列腺癌细胞的用途。 

本发明的目的通过下述技术方案实现： 

一种人前列腺癌细胞，分类命名为人前列腺癌细胞HPCC/HL-002，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2013102。

该细胞来源于人前列腺癌细胞，染色体核型为46+1，X,Y；短串联重复序列（STR）基因型以16个“STR基因座/等位基因长度”来表示：AMEL/X/Y，CSF1PO/10/12, D13S317/12/14, D16S539/11/12, D18S51/12/15, D19S433/14/17.2，D21S11/29/30，D2S1338/18/25，D3S1358/17/18， D5S818/9/12，D7S820/9/11，D8S1179/12/13，FGA/18/26，TH01/6/9.3， TPOX/9/11，vWA/14/17。