[发明专利]基于适体技术金纳米化学发光放大检测腺苷的方法

权利要求书

1.一种基于适体技术金纳米化学发光放大检测腺苷的方法，其特征在于包含以下步骤：（1）链霉亲和素金纳米制备：取100mL 0.01%HAuCl₄120℃加热至沸腾，迅速加入4mL 2%Na₃C₆H₅O₇再沸10min后自然冷却，再加入10 mL0.022mol/L链霉亲和素，反应10min，加入500μL 1%BSA稳定剂，6000r/min离心1h，弃去上清液，沉淀再用1%BSA洗涤3次，最后用pH7.0的0.1mol/L PBS缓冲液定容至100mL，置4℃下保存备用； （2）传感器检测腺苷：取40 μg羧基修饰的磁性微球，置于1.5mL离心管中，通过磁性分离器分离，弃去上清液，用100μL咪唑缓冲液洗涤磁性微球三次，加入100μL含1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺即EDC的0.1M pH6.0咪唑缓冲液悬浮磁性微球，置37℃ 的恒温振荡器中活化20min（振荡速度170r/min）；然后加入30pmol氨基修饰的腺苷适体，37℃ 的恒温振荡器中，反应lh; 磁性分离器分离，弃去上清液，用100μL WB (即7mM pH8.0 Tris–HCl、 0.17 M NaCl、0.05% Tween 20溶液) 溶液洗涤，进行三次；加入10%BSA溶液，37℃下封闭反应lh,WB溶液洗涤三次；加入10pmol生物素修饰的腺苷适体互补序列的BA（20 mM pH 8.0Tris–HCl、0.5 M NaCl溶液）溶液100μL， 37℃的恒温振荡器中反应lh，平行处理多份；分别加入一系列不同浓度的目标物腺苷及待测样品溶液，每管总体积为100μL，37℃的恒温振荡器中反应lh，磁性分离器分离，WB溶液洗涤三次；再分别加入50μL链霉亲和素金纳米SA-Au的PBS缓冲液， 37℃下恒温振荡器中反应1h；随后，最后用含有2%BSA的WB洗涤液通过磁性分离器洗涤磁性微球复合物3次；（3）检测方法：将磁性微球复合物用0.1M PBS定容50μL；加入4℃溴饱和水溶液50μL，常温下反应10min，60℃反应20min，从中取该溶液90μL与100μL10^-5mol/L鲁米诺溶液迅速混合后立即置化学发光仪中测定；以加入腺苷的浓度为横坐标，以发光强度为纵坐标，绘制标准曲线；根据标准曲线计算待测样品中腺苷浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（1）中溶液加入链霉亲和素之前，用0.1mol/LK₂CO₃调pH至6.8～7.0。