[发明专利]奶中一种或多种蛋白的提取方法

权利要求书

1.提取存在于奶中的至少一种蛋白的方法，所述蛋白表现出与所述奶中复合的或非复合的钙离子的亲和性，包括如下步骤：

a）通过将奶与可溶性盐接触产生钙化合物沉淀而释放蛋白，以通过这种方法获得蛋白富集的液相，该可溶性盐的阴离子选择具有在这种介质中形成不溶性钙化合物的能力的阴离子；

b)将蛋白富集的液相与钙化合物沉淀分离，而且，所述液相被分离成脂相和包含蛋白的水性非脂相；以及

c)回收含有蛋白的水性非脂相。

2.根据权利要求1的方法，其中可溶性盐是磷酸盐。

3.根据权利要求2的方法，其中磷酸盐选自由磷酸钠、磷酸锂、磷酸钾、磷酸铷和磷酸铯组成的组，而特别的，是磷酸钠。

4.根据权利要求1的方法，其中可溶性盐是碱金属草酸盐，特别是钠或钾的草酸盐，或碱金属碳酸盐，特别是钠或钾的碳酸盐，或上述的混合物。

5.根据权利要求1-4中任一的方法，其中可溶性盐在水溶液中的浓度在100mM到3M之间，更优选的，在200mM到500mM之间，特别的，在200mM到300mM之间。

6.根据权利要求1-5中任一的方法，其中步骤b）通过离心实现。

7.根据权利要求1-6中任一的方法，包括在步骤c）之后的用孔隙度逐渐减小的过滤器对水性非脂相连续过滤的步骤，孔隙度优选的为1μm、接着是0.45μm，接着是浓缩步骤/超滤透析步骤。

8.根据权利要求1-7中任一的方法，其中对脂相用孔隙度逐渐减小的过滤器进行过滤，孔隙度优选为1μm、接着是0.45μm。

9.根据权利要求1-8中任一的方法，其中蛋白是非自然存在于奶中的蛋白。

10.根据权利要求1-9中任一的方法，其中奶是转基因非人类哺乳动物奶。

11.根据权利要求10所述的方法，其中哺乳动物选自雌性的兔、绵羊、山羊、牛、猪和鼠。

12.根据权利要求9-11任一所述的方法，其中蛋白是凝血蛋白。

13.根据权利要求12所述的方法，其中蛋白选自由因子Ⅱ、因子Ⅶ、因子Ⅸ、因子Ⅹ、以及它们的活化形式、蛋白C、活化蛋白C、蛋白S和蛋白Z组成的组，或者是上述的混合物。

14.根据权利要求9-11任一所述的方法，其中蛋白是含有GLA域、EGF域（类表皮生长因子）或者具有固定钙离子能力的另外的域。

15.根据权利要求9-11任一所述的方法，其中蛋白是维生素K依赖性蛋白。

16.根据权利要求9-11任一所述的方法，其中蛋白是钙依赖蛋白。

17.根据权利要求9-11任一所述的方法，其中蛋白选自由因子Ⅷ、α-1抗胰蛋白酶因子、抗凝血酶Ⅲ、白蛋白、纤维蛋白原、胰岛素、髓鞘碱性蛋白、胰岛素原、纤溶酶原组织激活剂和抗体组成的组，或者上述的混合物。

18.根据权利要求9-11任一所述的方法，其中蛋白是转基因乳铁蛋白、乳球蛋白、溶菌酶和/或乳清蛋白。

19.奶中的水性非脂相，其特征在于其是高盐、碱性的，且含有可溶性酪蛋白和至少一种另外的蛋白，易于通过权利要求1-18中任一所述的方法获得。

20.根据权利要求1-18任一所述的方法，其中在步骤c）之后进行亲和层析步骤d），用基于磷酸盐的缓冲液以预定的浓度对蛋白进行洗提。

21.根据权利要求20所述的方法，其中亲和层析在载体为羟磷灰石胶(Ca₁₀(PO₄)₆(OH)₂)或者氟磷灰石(Ca₁₀(PO₄)₆F₂)胶的层析柱上实施。

22.根据权利要求20或21所述的方法，其中，对步骤d）中获得的洗提液进行切向过滤。

23.根据权利要求1-18任一所述的方法，包括在步骤c）之后直接进行的至少一步离子交换层析，且特别的，是两步连续的离子交换层析。