[发明专利]瑞香狼毒提取物在抗耐药性的药物中应用

说明书

技术领域

本发明属于药学领域，涉及瑞香狼毒提取物在抗肿瘤及抗耐药性的药物中的应用。

背景技术

据美国癌症协会估计，90%以上肿瘤患者的死亡受到不同程度耐药影响，肿瘤多药耐药(MDR)已成为肿瘤成功化疗的重要障碍之一。因此克服MDR就成为肿瘤成功化疗的当务之急，寻找具有抗耐药活性的新型化合物已成为克服肿瘤MDR的有效策略之一。

目前，肿瘤MDR产生的机制主要包括：肿瘤细胞凋亡敏感性降低、细胞存活信号与增殖信号通路的异常活化、药物靶分子修饰或空间构象改变、药物外排泵(P-glycoprotein,P-gp等)的过度表达、DNA损伤修复机制活性增强、药物解毒与消除酶的表达增多（如谷胱甘肽转移酶，GST）等。细胞存活AKT、ERK等信号通路是连接细胞外刺激和细胞内基因表达的桥梁，在肿瘤MDR中发挥着重要作用，其中AKT过表达可导致细胞的恶性转化、产生耐药表型，与肿瘤化疗耐受的关系十分密切。

在中药中寻找毒副作用小、药理作用独特的抗肿瘤耐药药物是解决肿瘤耐药性问题的途径之一，瑞香狼毒抗肿瘤作用历史悠久，为瑞香科狼毒属植物的根,又名红狼毒、棉大戟、断肠草，是狼毒中的正品，在我国大部分地区均有野生，中药狼毒始载于《神农本草经》，谓其具有散结、逐水、止痛、杀虫的功能；目前国内对瑞香狼毒化学成分的分离研究较多，相关的活性研究并不深入，以往主要研究成果主要有：（1）肿瘤细胞增殖的抑制作用：瑞香狼毒可以抑制肿瘤细胞有丝分裂、诱导细胞凋亡、调节细胞周期等,从而起到抑制细胞增殖的作用。(2)增加化疗药物对肿瘤多药耐药的敏感性。(3)免疫调节作用：增加小鼠免疫器官的重量，显著提高小鼠腹腔吞噬细胞活性,可明显促进脾淋巴细胞转化，从而有助于增强瑞香狼毒的抗肿瘤作用。而对于瑞香狼毒对耐药细胞的直接作用未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供瑞香狼毒提取物或单体组分在制备抗肿瘤耐药性的药物中的应用。

特别是，瑞香狼毒提取物或单体组分可引起KB及KBv200细胞G1期阻滞。

特别是，瑞香狼毒提取物或单体组分引发了细胞内源性凋亡通路。

特别是，瑞香狼毒提取物或单体组分能有引起KB、KBV细胞发生凋亡。

瑞香狼毒提取物或单体组分具有治疗肺癌、乳腺癌、肠癌、胰腺癌、皮肤癌、宫颈癌、胃癌、肝癌、白血病、淋巴癌、鼻咽癌等疾病的作用。

本发明所述瑞香狼毒提取物和单体既可以在市场上购买到，也可以通过常规技术手段加工得到，包括：粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、层析等方法得到。

本发明的所述的瑞香狼毒提取物，可以通过以下方法制备得到：

（1）正相硅胶柱层析：

取瑞香狼毒药材95%乙醇提取浸膏，以氯仿、甲醇中的一种或两种的混合液溶解，在不断搅拌下，加入与浸膏等质量的200-300目柱层析硅胶，拌样，常温下充分晾干；之后干法上样，常压下过200-300目硅胶柱，依次以氯仿、氯仿-甲醇100：1、氯仿-甲醇50：1、氯仿-甲醇20：1洗脱，收集氯仿-甲醇20：1流份，负压浓缩回收溶剂后，得一级粗分物。

（2）反相ODS柱层析：

将上述一级粗分物以甲醇溶解后，加入与一级粗分物等质量的粒径为40-50μm ODS柱层析填料拌样，常温下充分晾干并处理成粉状；之后干法上样，过40-50μm ODS层析柱（柱长40cm，内径8cm），中压泵加压，压力为5-10MPa，流量控制在50-100ml/min，依次以15%、30%、45%、60%、70%甲醇-水洗脱，收集70%甲醇-水流份，负压浓缩回收溶剂后，得二级粗分物。

本发明所述的瑞香狼毒提取物可以是一级粗分物，也可以是二级粗分物。

本发明所述瑞香狼毒单体组分，可以通过以下方法制备得到：

（1）高效液相色谱制备：

将上述二级粗分物以DMSO溶解，配制成浓度为50-100mg/ml的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；滤液采用柱长25-50cm、直径2-10cm的高效液相制备色谱柱进行分离，每次进样体积为0.5-2.5ml，以体积浓度70%-80%甲醇-水或45%-55%乙腈-水溶液为洗脱体系，流速控制在10-100ml/min，在线紫外检测，检测波长设定为295nm，分别收集含有化合物1、2、3、4、5、6的流份，负压干燥得6种粉末，即为纯度大于98%的化合物1、2、3、4、5、6纯品。