[发明专利]一种吸入过敏原的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法

权利要求书

1.一种吸入过敏原的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：包括如下试剂：

磁分离试剂：标记有吸入过敏原的磁微粒悬浮液，所述的标记有吸入过敏原的磁微粒的浓度为0.1~1.0mg/ml；

酶标试剂：含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体溶液，所述的含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体的浓度为0.5~1μg/ml。

2. 根据权利要求1所述的吸入过敏原的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：所述的吸入过敏原的纯度大于90%。

3. 根据权利要求1所述的吸入过敏原的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：所述的磁微粒具有超顺磁性，其直径为0.1~2μm，每克磁微粒表面的羧基含量不低于1毫摩尔。

4. 根据权利要求1所述的吸入过敏原的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：所述的吸入过敏原与所述的磁微粒的摩尔比为0.02~0.16:1。

5. 根据权利要求1所述的吸入过敏原的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：所述的抗人IgE抗体与所述的碱性磷酸酶的摩尔比为1:1~5。

6. 根据权利要求1所述的吸入过敏原的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：所述的碱性磷酸酶的纯度大于95%，比活性大于1000 U/mg，浓度大于5mg/ml。

7. 根据权利要求1所述的吸入过敏原的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：所述的抗人IgE抗体的纯度大于95%，浓度大于1 mg/ml。

8. 根据权利要求1至7中任一项所述的吸入过敏原的化学发光定量检测试剂盒的制备方法，其特征在于：

磁分离试剂的制备方法为：将所述的磁微粒用0.04~0.06mol/L、pH4.5~5 的2-吗啉乙磺酸缓冲液重悬；然后加入所述的吸入过敏原，在15~40℃下混悬30~60分钟；然后再加入新鲜配置的8~12mg/ml的碳二亚胺水溶液，在15~40℃下混悬2~12h，其中所述的2-吗啉乙磺酸缓冲液与所述的碳二亚胺水溶液的体积比为10~20:1；磁分离，去上清，用含质量比为4.5~5.5%的牛血清白蛋白、pH为8~9.5、物质的量浓度为0.01~0.5mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液重悬到所述的标记有吸入过敏原的磁微粒的浓度为0.1~1.0mg/ml，即得所述的磁分离试剂；

酶标试剂的制备方法为：将抗人IgE抗体加入到浓度为8~12mg/ml的2-亚胺基硫烷盐酸盐偶联剂中，在15~40℃下静置18~25分钟，加入0.09~0.11mol/L的甘氨酸溶液，在15~40℃下静置4~5分钟，用G-25凝胶柱除盐，收集活化后抗人IgE抗体，2~8℃保存备用；将碱性磷酸酶溶液加入到4~5mg/ml的4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶液中，在15~40℃下静置25~35分钟，用G-25凝胶柱除盐，收集活化后碱性磷酸酶，2~8℃保存备用；将活化后的抗人IgE抗体和活化后的碱性磷酸酶混合，在2~8℃下静置12~24h，用Supperdex200凝胶纯化柱纯化，获得连接物浓溶液，在2~8℃保存备用；将所述的连接物浓溶液用含质量比为0.4~0.6%的牛血清白蛋白、pH为7.8~8.0、物质的量浓度为0.09~0.11mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液稀释到含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体的浓度为0.5~1μg/ml，即得所述的酶标试剂。

9. 根据权利要求1至7中任一项所述的吸入过敏原的化学发光定量检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括依次进行的以下步骤：

步骤1：在检测管中加入待测样本原液，然后加入所述的磁分离试剂，混匀，在36~38℃下温育25~35分钟，其中所述的待测样本原液与所述的磁分离试剂的体积比为1:0.9~1.1；

步骤2：添加磁场，使步骤1温育后的体系在磁场中沉降，去除上清液，经清洗液多次清洗后，去除磁场，震荡使磁微粒充分混悬；

步骤3：向步骤2处理后的体系中加入所述的酶标试剂，混匀，在36~38℃下温育8~12分钟；

步骤4：添加磁场，使步骤3温育后的磁微粒在磁场中沉降，去除上清液，经清洗液多次清洗后，去除磁场，震荡使磁微粒充分混悬；

步骤5：添加磁场，使步骤4处理后的磁微粒在磁场中沉降，去除上清液，然后加入发光底物，去除磁场，充分混悬后检测5min内相对发光强度值。