[发明专利]一种以载体两性电解质修饰γ-谷氨酰转肽酶固定化酶的方法

权利要求书

1.一种以载体两性电解质修饰γ-谷氨酰转肽酶固定化酶的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

（1）甲苯的溶剂环境中，用3-氨丙基三乙氧基硅烷对介孔氧化钛表面进行化学改性反应，得到改性后的介孔二氧化钛；

（2）将γ-谷氨酰转肽酶酶液和步骤（1）得到的介孔二氧化钛混合，振荡制得固定化酶；

（3）将步骤（2）得到的固定化酶与两性电解质Pharmalyte混合，振荡反应；

（4）将步骤（3）反应液滤去残液，用缓冲液洗涤，滤干后即得。

2.根据权利要求1所述的以载体两性电解质修饰γ-谷氨酰转肽酶固定化酶的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的介孔氧化钛的比表面积为96.539m²/g，所述的介孔氧化钛预先在真空干燥、100℃～150℃条件下处理8～20h。

3.根据权利要求1所述的以载体两性电解质修饰γ-谷氨酰转肽酶固定化酶的方法，其特征在于，步骤（1）中，对于1g介孔二氧化钛，3-氨丙基三乙氧基硅烷的加入量为1～5ml，甲苯的加入量为80～120ml。

4.根据权利要求1所述的以载体两性电解质修饰γ-谷氨酰转肽酶固定化酶的方法，其特征在于，步骤（1）中，化学改性反应温度为50～120℃，反应时间3～10h。

5.根据权利要求1所述的以载体两性电解质修饰γ-谷氨酰转肽酶固定化酶的方法，其特征在于，步骤（2）中，γ-谷氨酰转肽酶酶液中酶的浓度为10U/g～30U/g，介孔二氧化钛和酶液的固液比为1g:1～20mL，反应温度0～20℃，反应时间为30min～1h。

6.根据权利要求1所述的以载体两性电解质修饰γ-谷氨酰转肽酶固定化酶的方法，其特征在于，步骤（3）中，固定化酶与两性电解质Pharmalyte的固液比为1g:1～15mL，反应温度0～20℃，反应时间4～30h。

7.根据权利要求1所述的以载体两性电解质修饰γ-谷氨酰转肽酶固定化酶的方法，其特征在于，步骤（4）中，用pH6～9的30～100mmol/LTris-HCl洗涤。