[发明专利]一种猪乙型脑炎病毒纯化方法

权利要求书

1.一种猪乙型脑炎病毒纯化方法，其特征在于使用微滤澄清纯化系统和超滤浓缩纯化系统实现病毒液的纯化，并包括以下步骤：

1）将无菌吐温20按0.5%～10%(v/v)的比例加入猪乙型脑炎病毒液中，振荡处理；

2）将步骤1）振荡处理后的病毒液注入微滤澄清纯化系统的进料罐中，开启循环泵，循环一定时间后经0.45或0.65μm中空纤维微滤柱微滤，收集透过液待用；

3）以1:1(v/v)的比例将无菌的0.1M PBS缓冲液加入进料罐中的截留液中，重悬，开启循环泵循环一定时间，收集透过液，得到第一洗滤液待用；

4）以1:1(v/v)的比例将无菌的0.1M PBS缓冲液加入到步骤3）处理完毕的进料罐中的截留液中，重悬，开启循环泵循环一定时间，收集透过液，得到第二洗滤液待用；

5）以1:1(v/v)的比例将无菌的0.1M PBS缓冲液加入到步骤4）处理完毕的进料罐中的截留液中，重悬，开启循环泵循环一定时间，收集透过液，得到第三洗滤液待用；

6）将上述透过液、第一洗滤液、第二洗滤液、第三洗滤液混合均匀，得到混合液；

7）将步骤6）得到的混合液注入超滤浓缩纯化系统的进料罐，开启循环泵循环一定时间，经100KD或300KD中空纤维超滤柱进行过滤处理，弃去透过液，收集进料罐中剩余截留液，即为初级浓缩病毒液；

8）以1:1(v/v)的比例将0.1M PBS注入进料罐中的初级浓缩病毒液中，重悬，开启循环泵循环一定时间，弃去透过液，收集进料罐中剩余截留液，即为二级浓缩病毒液；

9）以1:1(v/v)的比例将0.1M PBS注入进料罐中的二级浓缩病毒液中，重悬，开启循环泵，循环一定时间，弃去洗滤液，收集进料罐中剩余截留液，即为三级浓缩病毒液；

10）以1:1(v/v)的比例将0.1M PBS注入进料罐中的三级浓缩病毒液中，重悬，开启循环泵，循环一定时间，弃去洗滤液，收集进料罐中剩余截留液，即为病毒浓缩液成品。

2.根据根据权利要求1所述的一种猪乙型脑炎病毒纯化方法，其特征在于步骤1）所述的振荡处理时间为10min。

3.根据权利要求1所述的一种猪乙型脑炎病毒纯化方法，其特征在于步骤1）所述的比例为5%。

4.根据权利要求1所述的一种猪乙型脑炎病毒纯化方法，其特征在于步骤2）所述的微滤的滤膜孔径为0.45或0.65μm，较优的为0.65μm。

5.根据权利要求1所述的一种猪乙型脑炎病毒纯化方法，其特征在于步骤7）所述的超滤滤膜孔径为300KD。

6.根据权利要求1所述的一种猪乙型脑炎病毒纯化方法，其特征在于步骤2、3、4、5、7、8、9、10中所述的开启循环泵循环一定时间的操作条件均为400rpm循环30min。

7.根据权利要求1～6所述的一种猪乙型脑炎病毒纯化方法，其特征在于利用该方法制备的病毒浓缩液用于制备疫苗。