[发明专利]一种提高全细胞转化生产α‑酮戊二酸产量的方法有效
| 申请号： | 201410146961.3 | 申请日： | 2014-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN103937842B | 公开（公告）日： | 2017-01-18 |
| 发明（设计）人： | 陈坚;刘龙;堵国成;李江华;嘎子侯赛因;侯颖 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12P7/50 | 分类号： | C12P7/50;C12N15/53;C12N15/70;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙)11419 | 代理人： | 何自刚,王玉松 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 细胞 转化 生产 酮戊二酸 产量 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种提高全细胞转化生产α-酮戊二酸产量的方法，其特征在于以重组枯草芽孢杆菌为生产菌株，敲除其基因组中sucA基因。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述重组枯草芽孢杆菌为表达改造后L-氨基酸脱氨酶基因的枯草芽孢杆菌168。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述改造后L-氨基酸脱氨酶基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码的突变体为F110I/A255T/E31D/R228C/L249S/I351T。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于敲除重组枯草芽孢杆菌中sucA基因的方法为：通过PCR方法将sucA基因上下游约1000bp及抗性标记片段约1000bp融合，抗性标记片段两端含有突变的loxP位点；将此融合产物转化枯草感受态细胞，抗生素筛选发生同源重组的菌株；最后用温敏型质粒消去抗性，实现无痕敲除。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于敲除sucA基因后此全细胞催化剂转化L-谷氨酸生产α-酮戊二酸的产量为12.20g/L。
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