[发明专利]西兰苔凝集素的制备方法与应用

权利要求书

1.西兰苔凝集素的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：

（1）将西兰苔粉碎后加入缓冲溶液调节pH值，低温保存，过滤，取滤液离心后取上清液，盐析，低温保存后离心去沉淀，将沉淀溶解透析冷冻干燥得到西兰苔凝集素粗品；

（2）取步骤（1）所得西兰苔凝集素粗品溶解于缓冲液，离子交换层析，并梯度洗脱，收集第一个蛋白峰冻干保存，得到西兰苔凝集素样品；

（3）取步骤（2）得到的西兰苔凝集素样品溶解于缓冲液中，再进行凝胶色谱葡聚糖凝胶Sephadex G-75分离纯化，梯度洗脱，收集第一个蛋白峰冻干保存，得到西兰苔凝集素。

2.根据权利要求1所述西兰苔凝集素的制备方法，其特征在于，具体步骤如下

（1）将西兰苔洗净，切碎，冻干后粉粹，得到干粉，准确称取干粉10~100 g，加入100~500 ml缓冲液，置于冰箱中，过滤，滤液离心后收集上清液，将上清液在搅拌条件下加入硫酸铵晶体至饱和度为10%~90%，于冰箱中过夜，离心取沉淀，将沉淀加入蒸馏水溶解后，置于透析袋中进行透析,冷冻干燥，即为西兰苔凝集素粗品；

（2）称取步骤（1）得到的西兰苔凝集素粗品50~300 mg，溶解于0.5~5 ml ，pH为6~9的Tris-HCl缓冲液，用DEAE Sephadex A-52离子交换层析，并用NaCl溶液梯度洗脱，调节流速为0.5 ml/min，每管收集8 min，收集具有凝血活性的第一个蛋白峰冻干保存，得到西兰苔凝集素样品； 

（3）称取步骤（2）得到的西兰苔凝集素样品10~200 mg溶于0.5~5 ml pH为6~9的Tris-HCl缓冲液中，再进行凝胶色谱葡聚糖凝胶Sephadex G-75分离纯化，再用NaCl溶液梯度洗脱，调节流速为0.5 ml/min，每管收集8 min ，收集具有凝血活性的第一个蛋白峰冻干保存, 得到纯化的西兰苔凝集素BL；。

3.根据权利要求2所述的西兰苔凝集素的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述缓冲液为磷酸缓冲液, pH=6~9；所述离心的离心温度为4~8 ℃，转速为3000~10000 r/min, 离心时间10~60 min。

4.根据权利要求2所述的西兰苔凝集素的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述梯度洗脱为用浓度为0.1 mol/L~1 mol/L的NaCl溶液, 洗脱5次；所述NaCl溶液的溶剂为Tris-HCl缓冲液；所述Tris-HCl缓冲液 pH 6~9。

5.根据权利要求1所述的西兰苔凝集素的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述梯度洗脱为用浓度为1 mol/L~3 mol/L的NaCl溶液, 洗脱5次；所述溶液溶剂为Tris-HCl缓冲液；所述Tris-HCl缓冲液pH 6~9。

6.根据权利要求1所述的西兰苔凝集素的制备方法，其特征在于，所述西兰苔凝集素BL具有抗菌活性和抗肿瘤活性。

7.由权利要求1-6任一所述制备方法制备得到的西兰苔凝集素应用于抗菌功能食品或抗肿瘤医药的制备。