[发明专利]西兰苔凝集素的制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及西兰苔凝集素的制备方法与应用。 

背景技术

西兰苔，又称小小西兰花、芦笋型青花菜、青花笋，属十字花科芸薹属，由两种甘蓝类蔬菜西兰花与芥蓝杂交选育而成，因主要以肥嫩的花苔供食而得名。西兰花与芥蓝是蔬菜中公认的“抗癌”能手，而西兰苔集中了两者的优良性状，因此抗癌物质含量极高，同时还含有丰富的维生素A、B、E。据美国权威机构检测，其抗癌物质含量比普通蔬菜高出五到十倍，其抗肿瘤物质种类也多。 

凝集素(Lectin)是指一种糖蛋白或结合糖的蛋白，广泛存在于各种植物、无脊椎动物和高等动物中。大多数凝集素存在于植物的成熟种子中,但在叶、茎和根等组织器官中也有发现,它最大的特点是能够识别糖蛋白和糖脂，特别是细胞膜中复杂的糖链结构。凝集素对糖基的结合具有特异性，这可通过糖抑制试验进行研究，此特异性取决于凝集素中糖基结合位点的大小、形状、糖链中决定簇的位置等。 

凝集素具有细胞凝集能力，不仅能凝集红细胞，还能凝集肿瘤细胞，淋巴细胞，精子，细菌等。此外，凝集素还能识别并结合细菌、肿瘤细胞表面的糖结构，从而抑制它们的生长。鉴于凝集素的诸多功能，它被广泛应用于病原菌的防治，癌症的治疗，细胞的分型，含糖基生物大分子的检测等方面。 

近年来，国内外对凝集素的研究很多，越来越多的凝集素被发现，凝集素的生物学功能备受关注。但是西兰苔是一种新型蔬菜，目前国内外对西兰苔凝集素的分离纯化与应用尚未有报道。 

发明内容

为拓展西兰苔在食品和生物医学领域的应用,大幅提高这种新型蔬菜的附 加值，本发明的目的是提供西兰苔凝集素的制备方法与应用。 

为实现本发明目的，采用如下技术方案： 

（1）将西兰苔粉碎后加入缓冲溶液调节pH值，低温保存，过滤，取滤液离心后取上清液，盐析，低温保存后离心去沉淀，将沉淀溶解透析冷冻干燥得到西兰苔凝集素粗品； 

（2）取步骤（1）所得西兰苔凝集素粗品溶解于缓冲液，离子交换层析，并梯度洗脱，收集第一个蛋白峰冻干保存，得到西兰苔凝集素样品； 

（3）取步骤（2）得到的西兰苔凝集素样品溶解于缓冲液中，再进行凝胶色谱葡聚糖凝胶Sephadex G-75分离纯化，梯度洗脱，收集第一个蛋白峰冻干保存，得到西兰苔凝集素。 

西兰苔凝集素的制备方法，具体步骤如下： 

（1）将西兰苔洗净，切碎，冻干后粉粹，得到干粉，准确称取干粉10～100g，加入100～500ml缓冲液，置于冰箱中，过滤，滤液离心后收集上清液，将上清液在搅拌条件下加入硫酸铵晶体至饱和度为10%～90%，冰箱中过夜，离心取沉淀，将沉淀加入蒸馏水溶解后，置于透析袋中进行透析,24h之后冷冻干燥，即为西兰苔凝集素粗品； 

（2）称取步骤（1）得到的西兰苔凝集素粗品50～300mg，溶解于0.5～5ml，pH为6～9的Tris-HCl缓冲液，用DEAE Sephadex A-52离子交换层析，并用NaCl溶液梯度洗脱，调节流速为0.5ml/min，每管收集8min，收集具有凝血活性的第一个蛋白峰冻干保存，得到西兰苔凝集素样品； 

（3）称取步骤（2）得到的西兰苔凝集素样品10～200mg溶于0.5～5ml pH为6～9的Tris-HCl缓冲液中，再进行凝胶色谱葡聚糖凝胶Sephadex G-75分离纯化，再用NaCl溶液梯度洗脱，调节流速为0.5ml/min，每管收集8min，收集具有凝血活性的第一个蛋白峰冻干保存,得到纯化的西兰苔凝集素BL；。 

上述方法中，步骤（1）中所述缓冲液为磷酸缓冲液,pH=6～9；所述离心的离心温度为4～8℃，转速为3000～10000r/min,离心时间10～60min。 

上述方法中，步骤（2）中所述梯度洗脱为用浓度为0.1mol/L～1mol/L的NaCl溶液,洗脱5次；所述NaCl溶液的溶剂为Tris-HCl缓冲液；所述Tris-HCl缓冲液pH6～9。 

上述方法中，步骤（3）所述梯度洗脱为用浓度为1mol/L～3mol/L的NaCl溶液,洗脱5次；所述溶液溶剂为Tris-HCl缓冲液；所述Tris-HCl缓冲液pH6～9。 

上述方法中，所述西兰苔凝集素BL具有抗菌活性和抗肿瘤活性。 

西兰苔凝集素应用于抗菌功能食品或抗肿瘤医药的制备。 

与现有技术相比，本发明具有如下技术效果和优点：