[发明专利]青花菜品种台绿1号杂交种的快速鉴定方法

权利要求书

1.青花菜品种‘台绿1号’杂交种的快速鉴定方法，所述方法包括：

（1）待测青花菜样品的基因组DNA的提取；

（2）PCR扩增；

扩增引物序列如下：5’-TCTCTCTCTCTCTCTCN-3’；

PCR反应体系每15μL组成如下：待测样品基因组DNA10ng，10μM引物0.85μL，25mM Mg²⁺0.6μL，10mM dNTP0.3μL，5U·μL^-1Taq DNA聚合酶0.15μL，10×buffer1.5μL，无菌重蒸水补齐至15μL；

PCR反应条件如下：94℃预变性4min，94℃变性0.5min，51℃退火1min，72℃延伸2min，35个循环，72℃延伸10min，4℃保存；

（3）结果分析：取PCR产物与含8%GelRad核酸染料的Loading Buffer混合后上样于2%琼脂糖凝胶上，电泳分离后进行凝胶成像，以同时扩增出约800bp和约600bp的条带，判断待测样品为‘台绿1号’杂交种单株；否则不属于台绿1号’杂交种。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法进一步包括：根据鉴定结果计算待测青花菜样品的杂交种遗传纯度，所述杂交种遗传纯度=真杂交种株数÷待测样品株数×100%。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步骤（1）方法如下：

①苗期取青花菜的幼嫩叶片0.2～0.5g，剪成小块，装入离心管中，同时每只离心管加入1粒不锈钢钢珠，盖好离心管盖后放入装有液氮的泡沫盒中静置10～15min，倒出液氮，快速用力摇晃泡沫盒5～10min；

②打开离心管盖倒出钢珠，向离心管中加入CTAB裂解液，65±2℃水浴20～30min，所述CTAB裂解液组成如下：CTAB2%，EDTA20mmol/L，NaCl1.4mol/L，Tris50mmol/L，pH8.0；

③加入等体积的氯仿:异戊醇体积比24:1的混合液，轻轻摇晃后离心；

④取上清，加入2/3体积的预冷异丙醇，混匀，-20℃冰箱静置120min，离心；

⑤弃上清，取沉淀DNA用70%乙醇洗涤，干燥后加入ddH₂O-20℃保存备用。