[发明专利]一种产异戊二烯基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种产异戊二烯的基因工程菌，其特征在于，是在微生物中共表达乙酰辅酶A酰基转移酶、3-羟-3甲基戊二酰辅酶A合酶、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、末端烯烃形成脂肪酸脱羧酶和油酸水合酶的基因得到的重组菌。

2.根据权利要求1所述基因工程菌，其特征在于，所述重组菌的宿主菌为大肠杆菌E.coli BL21(DE3)；所述表达乙酰辅酶A酰基转移酶和羟甲基戊二酰辅酶A还原酶的基因是乙酰辅酶A酰基转移酶/羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因mvaE，GenBank登录序列号为AAG02438；所述表达3-羟-3甲基戊二酰辅酶A合酶的基因是3-羟-3甲基戊二酰辅酶A合酶基因mvaS，GenBank登录序列号为AAG02439；所述表达末端烯烃形成脂肪酸脱羧酶的基因是末端烯烃形成脂肪酸脱羧酶基因OleT，GenBank登录序列号为ADW41779.1；所述表达油酸水合酶的基因是油酸水合酶基因OhydEM，GenBank登录序列号为ACT54545.1。

3.一种利用权利要求1所述基因工程菌生物合成异戊二烯的方法，其特征在于，通过化学合成或克隆获得含有乙酰辅酶A酰基转移酶/羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因mvaE、3-羟-3甲基戊二酰辅酶A合酶基因mvaS、末端烯烃形成脂肪酸脱羧酶基因OleT和油酸水合酶基因OhydEM，构建含有上述基因的重组菌，再利用重组菌发酵生产异戊二烯。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤如下：

1）分别克隆或化学合成乙酰辅酶A酰基转移酶/羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因，3-羟-3甲基戊二酰辅酶A合酶基因,末端烯烃形成脂肪酸脱羧酶基因和油酸水合酶；

2）将步骤1）所得的基因连接到表达载体上，获得重组质粒；

3）将步骤2）所得的重组质粒转化到宿主菌，获得重组菌；

4）利用步骤3）所得重组菌，发酵生产异戊二烯。

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤1）中所述乙酰辅酶A酰基转移酶/羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因mvaE，GenBank登录序列号为AAG02438。

6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤1）中所述3-羟-3甲基戊二酰辅酶A合酶基因mvaS，GenBank登陆序列号为AAG02439。

7.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤1）中所述末端烯烃形成脂肪酸脱羧酶基因OleT，登录序列号为ADW41779.1。

8.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤1）中所述油酸水合酶基因OhydEM，登陆序列号为ACT54545.1。

9.根据权利要求4所述方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）分别化学合成乙酰辅酶A酰基转移酶/羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因mvaE，3-羟-3甲基戊二酰辅酶A合酶基因mvaS，末端烯烃形成脂肪酸脱羧酶基因OleT和油酸水合酶OhydEM，并分别与载体pGH连接；

2）将步骤1）所得的含有基因mvaE和基因mvaS的pGH载体与pACYDuet-1载体重组后获得重组质粒pACY-mvaE-mvaS；将步骤1）所得的含有基因OleT和基因OhydEM的pGH载体与pCOLADuet-1载体重组后获得重组质粒pCOLA-OleT-OhydEM；

3）将步骤2）中所得的重组质粒pACY-mvaE-mvaS和pCOLA-OleT-OhydEM转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中，获得重组菌；

4）利用步骤3）所得重组菌发酵生产异戊二烯。

10.权利要求1或2的基因工程菌在生产异戊二烯中的应用。