[发明专利]用于蛋白质组学分析的多肽混合物等电聚焦分离方法

权利要求书

1.一种用于蛋白质组学分析的多肽混合物等电聚焦分离方法，其特征在于：先将生物样品的总蛋白质混合物全部酶切成较短的肽段混合物，使用肽段等电聚焦缓冲液复溶肽段混合物，再采用上样杯上样方式进行等电聚焦电泳。

2.根据权利要求1所述的用于蛋白质组学分析的多肽混合物等电聚焦分离方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取细胞总蛋白质样品100微克，使用40mM碳酸氢铵溶解，分别加入40mM二硫苏糖醇和100mM碘乙酰胺进行还原和烷基化处理后，按质量比25:1加入4微克测序级胰蛋白酶，在37℃酶解12小时，将所有蛋白质酶切成16-25个氨基酸长度的多肽，得到多肽混合物；

（2）将步骤（1）所得多肽混合物在真空浓缩仪中抽干后，再加入200微升肽段等电聚焦缓冲液复溶；

（3）将步骤（2）中复溶的多肽混合物用于等电聚焦电泳仪电泳，以干胶条和上样杯组合方式上样；

（4）在等电聚焦电泳仪中进行多肽混合物电泳。

3.根据权利要求2所述的用于蛋白质组学分析的多肽混合物等电聚焦分离方法，其特征在于：步骤（2）中所述加肽段等电聚焦缓冲液是含有7M尿素的水溶液，并添加0.5%pH3-10两性电解质缓冲液。

4.根据权利要求2所述的用于蛋白质组学分析的多肽混合物等电聚焦分离方法，其特征在于：步骤（3）中所述上样是以13cm pH3-10IPG胶条作为聚焦底座，用上样杯压盖胶条形成独立上样口的杯上样方式，胶条上不覆盖石蜡油。

5.根据权利要求2所述的用于蛋白质组学分析的多肽混合物等电聚焦分离方法，其特征在于：步骤（4）中电泳参数为①500v，3h；②8000v，4h。

6.根据权利要求2所述的用于蛋白质组学分析的多肽混合物等电聚焦分离方法，其特征在于还包括以下步骤：

（5）步骤（4）的电泳程序完成后，将上样杯内12个槽中的液体分别取出，转移至新离心管中；

（6）步骤（5）中收集得到的12份预分离多肽溶液使用ZipTip C18脱盐枪头除盐，真空浓缩仪抽干；

（7）步骤（6）中抽干后的多肽使用easy-nLC1000纳升液相色谱分离，色谱柱为C18毛细管反相分离柱，再次分离后的肽段送入LTQ-Orbitrap质谱中采集信号，进行蛋白质鉴定。