[发明专利]小鼠成肌细胞的制备方法及其应用无效
| 申请号： | 201410157261.4 | 申请日： | 2014-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN103881966A | 公开（公告）日： | 2014-06-25 |
| 发明（设计）人： | 刘文斌;张晓东;杜润蕾;陈艳 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 张火春 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 小鼠 细胞 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种小鼠成肌细胞的制备方法，该方法包括下列步骤：
A）将刚离体、并剪碎的小鼠腿部肌肉按体积比1：2加入分散剂，在37℃颠倒摇动5-10min，1000rpm离心5min，去上清，得组织碎片；
B）组织碎片中按体积比1：2加入分散剂，在37℃上下颠倒摇动5-10min成浆糊状，按体积比1：10加入血清以终止酶消化；
C）过滤80μm无菌尼龙网，去除大的组织碎片，滤液1000rpm离心5min，去上清，得沉淀；
D）沉淀置胶原蛋白包被的培养皿中，加原代成肌细胞生长培养基，在37℃，5%CO2的培养箱中培养；
E）当成肌细胞生长到40-80％丰度时，去生长培养基，加分化培养基，每天更换分化培养基持续培养成肌细胞，直至肌管被诱导形成；
其中，分散剂组成是0.2%胶原酶和0.05%分散酶，余量为PBS，pH=7.5-7.8;原代成肌细胞生长培养基由80%F10，19%FBS，1%青霉素和链霉素，2.5-5.0ng/mL碱性成纤维细胞生长因子bFGF组成；分化培养基由94-97%DMEM，2-5%马血清，1%青霉素与链霉素组成。
2.根据权利要求1中的获得方法，该方法包括下列步骤：
A）将刚离体、并剪碎的小鼠腿部肌肉按体积比1：2加入分散剂，在37℃颠倒摇动5-10min，1000rpm离心5min，去上清，得组织碎片；
B）组织碎片中按体积比1：2加入分散剂，在37℃上下颠倒摇动5-10min成浆糊状，按体积比1：10加入血清以终止酶消化；
C）过滤80μm无菌尼龙网，去除大的组织碎片，滤液1000rpm离心5min，去上清，得沉淀；
D）沉淀置胶原蛋白包被的培养皿中，加原代成肌细胞生长培养基，在37℃，5%CO2的培养箱中培养；
E）当成肌细胞生长到80％丰度时，去生长培养基，加分化培养基，每天更换分化培养基持续培养成肌细胞，直至肌管被诱导形成；
其中，分散剂组成是0.2%胶原酶和0.05%分散酶，余量为PBS，pH=7.8;原代成肌细胞生长培养基由80%F10，19%FBS，1%青霉素和链霉素，和5.0ng/mL碱性成纤维细胞生长因子bFGF组成；分化培养基为100%马血清。
3）权利要求1或2制备的成肌细胞在研究肌管形成及肌肉发育细胞、分子机理方面的应用。
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