[发明专利]一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法

权利要求书

1.一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)构建自我剪切元件TmOCN；

2)构建带有自我剪切元件的打靶载体；

3)筛选阳性克隆细胞；

4)体细胞克隆获得F0代标记基因去除的阳性猪；

所述自我剪切元件TmOCN包括:精简的小鼠早期胚胎发育转录因子OCT4的特异启动子、Cre重组酶基因和转基因动物常用的neo筛选标记基因；

所述步骤2)将步骤1)构建的自我剪切元件TmOCN替换于普通的打靶载体的正筛选基因当中，得到带有自我剪切元件的打靶载体；

所述步骤3)将步骤2)得到的带有自我剪切元件的打靶载体，转染猪胎儿成纤维细胞，进行正负筛选获得打靶成功的阳性克隆细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述打靶载体为MSTN-TmOCNmarker free打靶载体。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4)将步骤3)筛选得到的阳性克隆细胞作为核移植供体细胞，离体的卵母细胞为核移植受体细胞，通过核移植技术进行体细胞克隆，获得F0代的标记基因去除阳性猪。

4.权利要求1-3任一项所述的方法在生产基因敲除克隆猪中的应用。