[发明专利]一种胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体及其应用；特别是涉及一种胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

大豆中胰蛋白酶抑制因子对植物本身具有保护作用,可防止大豆籽粒自身发生分解代谢,使种子处于休眠状态,能调节大豆蛋白质的合成和分解,并具有抗虫作用。胰蛋白酶抑制因子可抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶活性,降低蛋白质的消化、吸收利用,降低了大豆的营养价值和利用效果。

目前食品工业及饲料厂只能用尿酶活性来间接测试胰蛋白酶抑制因子含量。但酶化学检测方法步骤繁琐,每次检样量少,灵敏度低，结果变异大。

发明内容

本发明的目的是提供一种胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体及其应用，该抗体可以应用于胰蛋白酶抑制因子的检测。

一株杂交瘤细胞，其保藏编号为CGMCC No.8705。

由所述的杂交瘤细胞制备的抗体也属于本发明的保护范围。

所述抗体具体为单克隆抗体。

一种检测样品中胰蛋白酶抑制因子含量的试剂盒也属于本发明的保护范围，该试剂盒含有由所述的杂交瘤细胞制备的胰蛋白酶抑制因子的单克隆抗体。

上述试剂盒中，所述试剂盒由所述的杂交瘤细胞制备的胰蛋白酶抑制因子的单克隆抗体、胰蛋白酶抑制因子、包被缓冲液、封闭液、20×浓缩洗液、30×浓缩样品提取液、抗体稀释液、1×样品稀释液、酶标板、盖板膜、酶标试剂、底物液A、底物液B和终止液组成；

所述包被缓冲液为0.02M、pH7.4的磷酸盐缓冲液；

所述封闭液由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为BSA、小牛血清、吐温20和蔗糖；所述BSA在所述封闭液中的浓度为1g/100ml，所述小牛血清在所述封闭液中的体积百分含量为10%，所述吐温20在所述封闭液中的体积百分含量为0.05%，所述蔗糖在所述封闭液中的浓度为10g/100ml；

所述20×浓缩洗液由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为氯化钠、氯化钾、十二水合磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和吐温20；所述氯化钠在所述20×浓缩洗液中的浓度为160.0g/L，所述氯化钾在所述20×浓缩洗液中的浓度为4.0g/L，所述十二水合磷酸氢二钠在所述20×浓缩洗液中的浓度为72.6g/L，所述磷酸二氢钾在所述20×浓缩洗液中的浓度为4.8g/L，所述吐温20在所述20×浓缩洗液中的浓度为10mL/L；

所述30×浓缩样品提取液由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为Tris、HCl和β-巯基乙醇；所述Tris在所述30×浓缩样品提取液中的浓度为181.7g/L，所述HCl在所述30×浓缩样品提取液中的浓度为73ml/L，所述β-巯基乙醇在所述30×浓缩样品提取液中的浓度为21ml/L；

所述抗体稀释液由溶剂和溶质组成，溶剂为0.02M、pH7.4的磷酸盐缓冲液，溶质为吐温20和明胶；所述吐温-20在所述抗体稀释液中的浓度为0.1ml/L，所述明胶在所述抗体稀释液中的浓度为1g/L；

所述1×样品稀释液由溶剂和溶质组成，溶剂为PBS缓冲液，溶质为巯基乙醇和明胶，所述巯基乙醇在所述1×样品稀释液中的浓度为0.2M，所述明胶在所述1×样品稀释液中的浓度为0.01M；所述PBS缓冲液由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为NaCl、KCl、KH₂PO₄和Na₂HPO₄；所述NaCl在所述PBS缓冲液中的浓度为8g/L，所述KCl在所述PBS缓冲液中的浓度为0.2g/L，所述KH₂PO₄在所述PBS缓冲液中的浓度为0.2g/L，所述Na₂HPO₄在所述PBS缓冲液中的浓度为0.46g/L，所述PBS缓冲液的pH值为7.4；

所述酶标试剂为用所述抗体稀释液按体积比1︰5000稀释的HRP标记的羊抗鼠IgG溶液；

所述HRP标记的羊抗鼠IgG购自北京中杉金桥生物技术有限公司，产品目录号为ZB-2305。

所述底物液A由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为过氧化氢脲、十二水合磷酸氢二钠、一水柠檬酸和吐温20；所述过氧化氢脲在所述底物液A中的浓度为0.1g/100ml,所述十二水合磷酸氢二钠在所述底物液A中的浓度为3.58g/100ml,所述一水柠檬酸在所述底物液A中的浓度为1.03g/100ml,所述吐温20在所述底物液A中的体积百分含量为0.01%；