[发明专利]重组人促红素聚乙二醇化反应液的光谱检测法及应用

权利要求书

1.一种重组人促红素聚乙二醇化反应液的光谱检测法，其特征在于，包括以下步骤：

S1稀释：取n份反应液样品，用水将反应液样品按不同的稀释倍数进行稀释，得到n种不同浓度的稀释液，n≧3；

S2配置检测体系：将各稀释液与磷酸盐缓冲液和纳米金溶胶于不同的比色管中混合，并用水定容至刻度得到具有不同浓度的检测液，然后将检测液显色5min以上；所述磷酸盐缓冲液的浓度为10-60mM，pH为5.0－8.0；所述纳米金溶胶的浓度为1.0×10^-11－6.0×10^-9mol/L；所述磷酸盐缓冲液、纳米金溶胶和稀释反应液的体积比为2:1:1；

S3、检测：用紫外光谱仪测各检测液在260nm处的吸光度A₂₆₀；

S4、数据处理：将各检测液的吸光度A₂₆₀及稀释倍数进行线性拟合，得拟合曲线A₂₆₀=ax+b，x为稀释倍数；取a的绝对值得吸光度下降系数k₂₆₀。

2.根据权利要求1所述重组人促红素聚乙二醇化反应液的光谱检测法，其特征在于，步骤S1和步骤S2中所述水为注射用水。

3.根据权利要求2所述重组人促红素聚乙二醇化反应液的光谱检测法，其特征在于，步骤S1中所述稀释倍数分别为4倍、8倍和10倍。

4.根据权利要求3所述重组人促红素聚乙二醇化反应液的光谱检测法，其特征在于，步骤S2中所述磷酸盐缓冲液的浓度为40mM，pH为7.0。

5.根据权利要求4所述重组人促红素聚乙二醇化反应液的光谱检测法，其特征在于，步骤S2中所述纳米金溶胶的浓度为3.0×10^-9mol/L。

6.根据权利要求5所述重组人促红素聚乙二醇化反应液的光谱检测法，其特征在于，骤S2中所述纳米金溶胶的粒径为15-25nm。

7.根据权利要求6所述重组人促红素聚乙二醇化反应液的光谱检测法，其特征在于，步骤S2中所述检测液显色5-20min。

8.一种多个重组人促红素聚乙二醇化反应液合并前的快速鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1紫外检测：对每个反应液分别依次进行如权利要求1所述的稀释、配置检测体系、检测和数据处理四个步骤，得到每个反应液的吸光度下降系数k₂₆₀；

S2高效液相色谱检测：用高效液相色谱仪检测其中一个反应液的聚乙二醇化反应率；该反应液为基准反应液；

S3、比较：将其它反应液的吸光度下降系数k₂₆₀与基准反应液的吸光度下降系数k₂₆₀比较，具有相同吸光度下降系数k₂₆₀的反应液的聚乙二醇化反应率相等或相差±1.5%。

9.根据权利要求8所述一种多个重组人促红素聚乙二醇化反应液合并前的快速鉴定方法，其特征在于，还包括合并-验证步骤，即将不同的反应液合并得到合并液，然后用高效液相色谱仪检测合并液的聚乙二醇化反应率。

10.根据权利要求9所述一种多个重组人促红素聚乙二醇化反应液合并前的快速鉴定方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测条件为：流动相是浓度为50mM，pH为6.8的磷酸盐缓冲液；检测波长为280nm；流速为0.5mL/min。