[发明专利]苜蓿多糖的制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及植物多糖成分的功能研究，具体地涉及从苜蓿中提取多糖成分，及其提高蛋鸡肝细胞抗氧化能力和预防肝细胞脂肪变性的功能。 

背景技术

苜蓿是一种多年生优质草本豆科牧草，在世界各国广泛种植，素有“牧草之王”的美称，资源十分丰富。苜蓿多糖是从苜蓿茎叶中提取的水溶性多糖，具有多种生物功能，同时，苜蓿的广泛来源为苜蓿多糖的生产提供了充足且廉价的原料，因此苜蓿多糖具有良好的应用前景。 

蛋鸡脂肪肝出血综合征是一种主要发生于产蛋高峰期蛋鸡的营养代谢紊乱性疾病。该病的主要特征为肝脏脂肪含量急剧上升，一般超过肝脏干重的40％，肝细胞脂肪变性明显，有严重者肝脏发生出血现象，最终导致蛋鸡产蛋率下降，甚至死亡，发病率为5％左右，进而降低养殖者的经济收益。蛋鸡脂肪肝出血综合征的发病原因主要有日粮因素、遗传因素和激素分泌等。患有该疾病的蛋鸡，血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力下降，血清和肝脏中的MDA含量升高，说明脂质发生过氧化造成的肝脏损伤在蛋鸡形成脂肪肝过程中起重要作用。由于该病属于营养代谢病，所以通过饲料添加剂技术，如微生态制剂、植物功能成分制剂等，调节蛋鸡的营养代谢，从而降低该病的发病率是研究人员达成的一致共识。 

本发明在实验室前期试验的基础上，对通过复合酶技术提取的苜蓿多糖进行分级纯化，利用蛋鸡肝细胞做为体外研究模型，分别通过过氧化氢和混合脂肪酸诱导建立肝细胞氧化应激模型和脂肪变性模型，研究纯化苜蓿多糖对蛋鸡肝细胞氧化状态和脂肪代谢的影响，为苜蓿多糖预防蛋鸡脂肪肝出血综合症提供理论依据，进而促进新型饲料添加剂——苜蓿多糖的创制与应用。 

发明内容

本发明提供了从苜蓿中分离得到多糖成分、其制备方法及其提高蛋鸡肝细胞抗氧化能力和预防肝细胞脂肪变性的生物功能，为苜蓿多糖应用到食品、饲料等领域中提供新的理论依据。 

本发明第一方面涉及苜蓿多糖，其包含一种或数种苜蓿多糖成分： 

(1)APS-2a的重均分子量为48536Da，单糖组成和摩尔比为阿拉伯糖∶半乳糖∶半乳糖醛酸＝4.88∶13.53∶1.00； 

(2)APS-2b的重均分子量为6221Da，单糖组成和摩尔比为木糖∶阿拉伯糖∶鼠李糖∶半乳糖∶葡萄糖醛酸∶半乳糖醛酸＝1.00∶7.34∶4.98∶9.75∶3.25∶24.60； 

(3)APS-3a的重均分子为4513Da和66559Da，单糖组成和摩尔比为木糖∶阿拉伯糖∶鼠李糖∶半乳糖∶半乳糖醛酸＝1.00∶1.77∶1.82∶4.65∶24.60； 

(4)APS-3b的重均分子量13076Da，单糖组成和摩尔比为木糖∶阿拉伯糖∶葡萄糖∶鼠李糖∶半乳糖∶葡萄糖醛酸∶半乳糖醛酸＝1.00∶2.35∶3.78∶3.05∶2.74∶11.45∶1.72。 

本发明第二方面涉及本发明第一方面的苜蓿多糖的制备方法，其包括以下步骤： 

(1)称取适量通过复合酶技术提取的苜蓿总多糖(中国专利，公开号CN103304678A，公布日2013.09.18)，蒸馏水溶解后进行DEAE-纤维素柱层析，依次用H₂O、0.25mol/L NaHCO₃和0.5mol/L NaHCO₃进行洗脱，利用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制多糖洗脱曲线，收集不同多糖组分，分别命名为APS-1、APS-2和APS-3；洗脱曲线见图1。 

(2)APS-2洗脱组分经Sephadex G-100柱层析，获得苜蓿多糖APS-2a和APS-2b；洗脱曲线见图2和图3。 

(3)APS-3洗脱组分经SephadexG-100柱层析，获得苜蓿多糖APS-3a和APS-3b；洗脱曲线见图4和图5。 

本发明第三方面涉及本发明第一方面的一种或数种苜蓿多糖具有提高蛋鸡肝细胞抗氧化能力和预防肝细 胞脂肪变性的生物功能。 

附图说明

图1苜蓿总多糖经DEAE-纤维素柱层析的洗脱曲线图 

图2APS-2a洗脱组分经Sephadex G-100柱层析洗脱曲线图 

图3APS-2b洗脱组分经Sephadex G-100柱层析洗脱曲线图 

图4APS-3a洗脱组分经Sephadex G-100柱层析洗脱曲线图 

图5APS-3b洗脱组分经Sephadex G-100柱层析洗脱曲线图