[发明专利]一种食源性致病菌DNA的阶段控温快速提取方法

权利要求书

1.一种食源性致病菌DNA的阶段控温快速提取方法，该方法包括如下步骤：

(a)取1-5mL食源性致病菌培养液，8000-12000rmp离心1-4min，使细菌细胞沉淀，弃上清；

(b)往步骤(a)制得的菌体沉淀中加入100-500uL无菌双蒸水，充分混合，8000-12000rmp离心1-4min，弃上清；

(c)往步骤(b)制得的细菌沉淀中加入100-500uL细胞裂解液，悬浮细菌沉淀，并于105℃-126℃油浴10s-3min；

(d)将步骤(c)所得的混合液立即移至70℃-95℃中水浴5-30min；

(e)步骤(d)结束后，8000-12000rmp离心1-4min取上清，上清液即为模板DNA，对提取所得DNA用于分析检测，剩余DNA于-20℃保存备用。

2.根据权利要求1所述的食源性致病菌包括金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、单核增生李斯特菌、副溶血性弧菌等。

3.根据权利要求1所述步骤(a)中，细胞培养液为取食品样品10-25g(mL)或致病菌菌株至适宜液体培养基，于最适培养温度培养12-20h。

4.根据权利要求1所述步骤(c)中，细胞裂解液为：0-10％chelex-100水溶液。

5.根据权利要求1所述步骤(e)中所述对DNA进行分析检测，其特征在于，所述的DNA浓度通过琼脂糖凝胶电泳或测定OD260，OD260/OD280比值得到。所得致病菌DNA浓度在50-400ng/uL，所得的DNA纯度OD260/OD280比值为1.6-1.8；且所得的DNA质量可以满足普通PCR、荧光PCR、环介导等温扩增等检测方法的要求。