[发明专利]边界病病毒重组E2蛋白及其IgG抗体检测试剂盒无效
| 申请号： | 201410161997.9 | 申请日： | 2014-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN103951734A | 公开（公告）日： | 2014-07-30 |
| 发明（设计）人： | 毛立;李文良;刘霞;江杰元;杨蕾蕾;张纹纹;邓加武;王钟毓 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C07K14/08 | 分类号： | C07K14/08;C12N15/40;C12N15/70;G01N33/68 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 张素卿 |
| 地址： | 210014*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 边界 病毒 重组 e2 蛋白 及其 igg 抗体 检测 试剂盒 | ||
1.一种边界病病毒重组E2蛋白，该蛋白系将包含E2主要抗原区的基因片段克隆入原核表达载体pET-32a得到重组表达载体，将该重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，该重组大肠杆菌BL21(DE3)培养至OD600达0.6-0.8时加入终浓度为0.5mM的IPTG进行诱导表达，分离菌体经Ni亲和层析柱纯化获得。
2.根据权利要求1所述的重组E2蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1。
3.根据权利要求1或2所述的重组E2蛋白，其特征在于，编码该蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO.2。
4.权利要求1-3之一所述的边界病病毒BDV重组E2蛋白的制备方法，包括如下步骤：
（1）根据边界病病毒基因序列设计引物F: CGGGATCCTGTCCTTGTGATTCCAAGCC（SEQ ID NO.3）、R: CCCTCGAGACTATCCCTAGGTTCATAGTA（SEQ ID NO.4），从BDV JSLS12-01病毒株提取RNA，经RT-PCR扩增得到编码目的基因片段（SEQ ID NO.2），通过BamHⅠ和XhoⅠ两个酶切位点，把所述的基因片段克隆入原核表达载体中，然后通过酶切和测序鉴定，获得阳性重组质粒；
（2）将步骤（1）所述的经序列测定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），得到重组表达菌株BL21-E2；
（3）培养所述的重组表达菌株BL21-E2，加入IPTG 进行诱导表达，经亲和柱纯化获得所述的重组蛋白。
5.用权利要求1-3之一所述的边界病病毒重组E2蛋白建立检测BDV IgG抗体的ELISA试剂盒。
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