[发明专利]边界病病毒重组E2蛋白及其IgG抗体检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种边界病病毒重组E2蛋白和边界病病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒。

背景技术

大肠杆菌表达系统是目前比较成熟的表达系统，具有操作简单，安全无毒，外源蛋白表达量高等优点，已经成功用于多种蛋白的生产。E2蛋白是边界病病毒（Border disease virus，BDV）的主要囊膜蛋白，介导病毒感染入胞和保护性免疫反应，是BDV主要的免疫保护性抗原。目前国际普遍采用的边界病病毒抗体的检测方法主要基于全病毒建立间接ELISA方法和中和实验，国内尚无研究报道，此外对于该蛋白诱导IgG抗体产生规律的研究尚未进行，本发明旨在建立检测边界病E2蛋白IgG抗体的ELISA方法，为临床检测和相关研究奠定基础。

发明内容

技术问题

本发明的目的是针对目前尚无BDV IgG抗体检测方法的现状，提供一种准确可靠的BDV IgG抗体ELISA检测试剂盒。

本发明的另一目的是提供用于ELISA方法的重组E2蛋白的制备方法。

技术方案

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种边界病病毒重组E2蛋白，该蛋白系将包含E2主要抗原区的基因片段克隆入原核表达载体得到重组表达载体，将该重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，该重组大肠杆菌BL21(DE3)培养至OD₆₀₀达0.6-0.8时加入终浓度为0.5mM的IPTG进行诱导表达，分离菌体经Ni亲和层析柱纯化获得。

所述边界病病毒BDV重组E2蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO.1，即边界病病毒（毒株JSLS12-01为参考毒株）的多聚蛋白第793-1002位氨基酸残基:

CPCDSKPVVKGKFNTTLLNGNAFQLVCPLGWVGQVECTTVSTTTLAVEVVKTYKRSKPFPRRAGCDHTTISGEDLYHCTMG GNWTCIKGEQVRYAGGAVKQCKWCDFIFREKAGLTHYPIGKCILNNETGYRYVDDTPCEKGGVAISKTGNLECLIGETVVK VFSTDERLGPMPCRPKEVISSEGPISKTACTFNYSKTLKNKYYEPRDS

其核苷酸序列为SEQ ID NO.2。

TGTCCTTGTGATTCCAAACCCGTGGTTAAGGGTAAATTCAATACAACACTGCTCAACGGGAATGCATTCCAGTTAGT CTGCCCTCTAGGGTGGGTAGGACAAGTGGAGTGTACCACCGTGAGCACCACCACTTTAGCCGTTGAAGTGGTGAAAACATA TAAAAGGAGCAAACCATTCCCCCGAAGAGCTGGCTGTGACCACACCACCATTTCTGGAGAAGACCTGTATCACTGCACGAT GGGTGGCAACTGGACTTGCATTAAAGGTGAACAAGTGAGGTACGCTGGGGGTGCAGTTAAGCAGTGCAAGTGGTGTGACTT CATATTTAGAGAAAAAGCTGGTCTTACTCACTACCCAATAGGCAAGTGCATTTTAAATAATGAGACAGGTTACAGGTATGT AGATGACACACCATGTGAAAAGGGTGGGGTGGCGATTAGTAAGACCGGGAATCTAGAGTGCTTGATAGGGGAAACCGTGGT GAAGGTGTTTAGCACGGATGAGAGGTTAGGACCTATGCCTTGCAGGCCGAAGGAAGTGATATCTAGTGAGGGGCCCATCAG TAAGACCGCCTGCACTTTCAACTATTCAAAAACCCTCAAGAACAAATACTATGAACCTAGGGATAGT

所述的原核表达载体为pET32a。

本发明所述的重组大肠杆菌表达的BDV E2蛋白的制备方法，包括如下步骤：

（1）根据BDV JSLS12-01株基因序列设计引物F:CGGGATCCTGTCCTTGTGATTCCAAGCC（SEQ ID NO.3）、R:CCCTCGAGACTATCCCTAGGTTCATAGTA（SEQ ID NO.4），从BDV JSLS12-01株病毒中提取RNA，经RT-PCR扩增得到编码目的基因片段（目的基因片段为SEQ ID NO.2，不包含酶切位点和保护性碱基），通过BamH Ⅰ和Xho Ⅰ两个酶切位点，把所述的基因片段克隆入原核表达载体中，然后通过酶切和测序鉴定，获得阳性重组质粒；