[发明专利]一种水蛭的DNA条形码分子鉴定方法

权利要求书

1.一种水蛭的DNA条形码分子鉴定方法，其特征在于采用DNA条形码鉴定的水蛭为蚂蝗Whitmania pigra Whitman，亦称宽体金线蛭。

2.根据权利要求1所述的DNA条形码分子鉴定方法，其步骤主要包括：

(1)从待测的水蛭组织中分离提取总DNA；

(2)以该DNA为模板用一对引物，通过聚合酶链式反应扩增出水蛭COI基因；

(3)然后取适量步骤(2)的聚合酶链式反应扩增出的COI基因产物用琼脂糖电泳分离鉴定扩增产物大小，送生物公司测序；

(4)根据测序结果，进行分析比对，如果与所述基因序列SEQ ID NO.1的同源性在99％以上，即可判断所述的待测组织即为宽体金线蛭来源。

3.根据权利要求2所述的引物，其特征在于引物DNA的序列为：

LCO1490：5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’；

HCO2198：5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’。

4.根据权利要求2所述聚合酶链式反应，其特征在于扩增条件为94℃预变性1分钟，45℃退火1.5分钟，72℃延伸1.5分钟，5个循环；94℃变性1分钟，50℃退火1.5分钟，72℃延伸1分钟，35个循环；72℃延伸5分钟。

5.根据权利要求2所述扩增产物，其特征在于扩增片段为709bp，用1％-2％琼脂糖电泳检测。

6.根据权利要求2所述的一种水蛭的DNA条形码标准检测基因序列，其特征在于所述条形码标准检测基因为CO I基因，具有如下所述的基因序列SEQ ID NO.1：

AAATAAATGTTGAAACAAAATAGGATCCC CC CCTCCTATAGGGTCAAAGAAAGTAGTATTTAAATTTCGATCTGTAAGTAATATTGTAATAGCTGCTGCTAAAACTGGTAATGATAACAATAATAAAATAGTAGTAATAACAACTGACCAAACAAATAATGGTACTCGTTCAGTTGTTATTCCTTTAGTTCGTATATTTATAATAGTCGAAATAAAATTTAATGACCCTAAAATAGATGAGGCACCAGCTATATGTAATGAAAAGATGGCTATGTCAACGGATGGGCCTGAATGAGATACGGAGTCTGATAGTGGAGGATAAAGGGTTCACCCTGCACCTACACCACCCTCAATTAAGGATGACCTAAGCAATATGATTATTGAAGGGGGTAGTAACCAAAATCTTAAGTTATTCAGACGAGGAAACGATATATCTACGGCCCCTACCATTAATGGTAGGAGTCAATTACCAAACCCACCAATTAGAATTGGTATAACTATAAAGAAGATTATAACCAACCCATGAGCCGTTACTAGTGAATTATACAATTGGTCGTCTCCAAGGAATCTTCCTGGCTGTGCTAATTCAATTCGAATAATTGATCTTATAGAAGAGCCTAACATAGCTGATCACGTTCCTAAAATAAAGTATAAAGTA。