[发明专利]构建体及其应用

权利要求书

1.一种构建体，其特征在于，包含SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的构建体，其特征在于，所述构建体呈选自质粒、噬菌体、人工染色体、粘粒以及病毒的至少一种的形式，优选质粒的形式。

3.根据权利要求1所述的构建体，其特征在于，进一步包括启动子，所述启动子与SEQID NO：1所示的核苷酸序列可操纵地连接，

优选所述启动子为CMV启动子。

4.根据权利要求1所述的构建体，其特征在于，进一步包括筛选标记，

任选地，所述筛选标记为荧光蛋白基因，优选GFP，RFP，DsRed，YFP，CFP，BFP和Cherry基因的至少之一，

任选地，所述筛选标记为药物抗性基因，优选新霉素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因的至少一种，

任选地，所述筛选标记为选自His和Flag标签的至少一种。

5.一种制备转基因动物细胞的方法，其特征在于，包括：

使用权利要求1-4任一项所述的构建体转化宿主细胞；以及

分离转基因动物细胞，

任选地，所述转基因动物细胞来源于哺乳动物，优选小鼠。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，利用选自电转、PEI转、钙转、脂质体转、逆转录病毒和慢病毒感染的至少一种方法进行所述转化。

7.一种转基因动物细胞或其培养物，其中所述转基因动物细胞是通过权利要求5或6所述的方法获得的。

8.一种使非人动物线粒体功能缺失的方法，其特征在于，

使用权利要求1-4任一项所述的构建体转化所述非人动物。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

使用权利要求1-4任一项所述的构建体转化非人动物细胞；

分离转基因动物细胞；

将所述转基因动物细胞引入所述非人动物的怀孕个体的囊胚；

使所述怀孕个体生产，以便获得嵌合体动物；以及

将所述嵌合体动物进行杂交繁育，以便获得转基因动物。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

使用权利要求1-4任一项所述的构建体转化所述非人动物细胞；

分离转基因动物细胞；

提取所述转基因动物细胞的细胞核；

将所述细胞核引入所述非人动物的无核卵母细胞中，以便获得融合卵母细胞；以及

将所述融合卵母细胞在适宜的条件下进行培养，以便获得非人转基因动物，

任选地，所述非人动物为哺乳动物，优选小鼠，

任选地，所述无核卵母细胞是通过手工克隆方法去除卵子中的遗传物质而获得的。