[发明专利]重组依赖的核酸滚环扩增方法在审
| 申请号： | 201410168939.9 | 申请日： | 2014-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN103966197A | 公开（公告）日： | 2014-08-06 |
| 发明（设计）人： | 俞国华 | 申请（专利权）人： | 俞国华 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200062 上海市普*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 依赖 核酸 扩增 方法 | ||
1.一种拓扑异构酶介导环化的核酸滚环扩增方法，其特征在于，整个扩增过程包括以下步骤：
（1）设计4个可与靶序列结合的引物，两个为内引物（B1和F1），两个为外引物（B2和F2），其中一个内引物的5’端含有拓扑异构酶特异识别位点；
（2）通过具有链置换功能的DNA聚合酶的作用，产生单链DNA，该单链DNA的一端含有拓扑异构酶特异识别位点；
（3）由拓扑异构酶介导该单链DNA的环化；
（4）环状单链DNA的滚环扩增。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的拓扑异构酶为具有位点特异识别功能的拓扑异构酶。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的拓扑异构酶为牛痘病毒拓扑异构酶I。
4.一种位点特异性重组酶介导环化的核酸滚环扩增方法，其特征在于，整个扩增过程包括以下步骤：
（1）设计4个可与靶序列结合的引物，两个为内引物（B1和F1），两个为外引物（B2和F2），其中两个内引物的5’端均含有位点特异性重组酶特异识别位点；
（2）通过具有链置换功能的DNA聚合酶的作用，产生单链DNA，该单链DNA的两端含有位点特异性重组酶特异识别位点；
（3）由位点特异性重组酶介导该单链DNA的环化；
（4）环状单链DNA的滚环扩增。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述的位点特异性重组酶可以是酪氨酸型重组酶、酪氨酸型整合酶、丝氨酸型反转酶、丝氨酸型整合酶以及其他一切具有位点特异性重组功能的酶。
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