[发明专利]抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞的制备方法

权利要求书

1.一种抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，包括步骤：

A）携带肿瘤抗原基因重组载体的构建；

B）DC细胞的分离与培养；

C）使用步骤A）所述重组载体转导步骤B）所述的未成熟DC细胞；

D）进一步通过细胞因子诱导步骤C）所述的未成熟DC细胞成为成熟DC细胞；

E）将步骤D）所述的成熟DC细胞与T淋巴细胞共培养，获得具有抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。

2.如权利要求1所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是：所述步骤A）所述的重组载体的载体为病毒载体。

3.如权利要求2所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是：所述步骤A）所述的重组载体的载体为慢病毒载体。

4.如权利要求1所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是：所述步骤A）所述的肿瘤抗原基因为新构建的癌胚抗原 (CEA) 基因片段，或黑色素瘤相关抗原A3(MAGE-A3)基因片段， 或粘蛋白1抗原(MUC1)基因片段；所述癌胚抗原基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述黑色素瘤相关抗原A3基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述粘蛋白1抗原基因片段如SEQ ID NO:3所示。

5.如权利要求4所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是：所述携带肿瘤抗原基因重组载体为携带癌胚抗原 (CEA) 基因，或携带黑色素瘤相关抗原A3(MAGE-A3)基因，或携带粘蛋白1抗原(MUC1)基因的重组载体的一种，或者两种或者三种混合重组载体。

6.如权利要求1所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是，所述步骤C）使用重组载体转导未成熟DC细胞所用的重组载体为一种携带肿瘤抗原基因片段的重组载体，或者两种或两种以不同肿瘤抗原基因片段的重组载体的混合重组载体。

7.如权利要求6所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是：所述步骤C）使用重组载体转导未成熟DC细胞所用的重组载体为分别携带癌胚抗原基因片段，粘蛋白1抗原基因片段，黑色素瘤相关抗原A3基因片段的三种重组载体混合物。

8.如权利要求1所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是：所述步骤B）为从肿瘤患者的外周血中分离单个核细胞，将单个核细胞被进一步分离为淋巴细胞和单核细胞，淋巴细胞冻存或继续培养，备用；单核细胞经体外诱导分化为未成熟DC细胞。

9.如权利要求8所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是：所述外周血中分离单个核细胞，经体外培养，经细胞因子GM-CSF或/和IL4诱导分化为未成熟DC细胞。

10.如权利要求1所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是：所述步骤D）所述细胞因子为细胞因子TNF-α或/和IFN-gama。