[发明专利]结核分枝杆菌特异性重组蛋白OTC及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种结核分枝杆菌特异性重组蛋白OTC及其制备方法和应用，具体涉及应用基因工程技术制备的一种结核分枝杆菌特异性的重组蛋白OTC及其制备方法，并应用该蛋白作为检测抗原组成的血液或尿液结核抗体化学发光酶免疫检测试剂盒，属于结核病医学免疫学检测技术领域。

背景技术

在全世界结核病依然是危害人类健康的主要传染病之一，1985年以来艾滋病的流行、结核感染的移民和部分人群生活贫困等原因使美国等欧美发达国家结核病发病率呈回升趋势，尤其是结核菌耐药问题、与人免疫缺陷病毒(HIV)合并感染使结核病治疗更是雪上加霜。目前全世界有结核病人约2000万，每年新增结核病人800～1000万，每年死亡人数约200万。

中国的结核病疫情相当严重，是全球22个结核病高负担国家之一，结核病人数位居世界第二，仅次于印度。根据2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查结果显示，我国15岁及以上人群肺结核患病率459/10万(结核病人数约597万/13亿)，其中传染性肺结核患病率66/10万(传染性肺结核病人数约86万/13亿)，由此可见，菌阴肺结核占85.6％。结核病死亡在传染病中居第一位。结核病也是AIDS感染者死亡的主要原因，根据1996年WHO统计每3个死亡的AIDS患者中就有一例死于合并结核，45-85％HIV死亡者是由于结核病诊断延误所致。

早期诊断、发现病人、选择敏感的抗结核药物进行有效治疗是控制结核病的关键。结核病的诊断方法有很多种，临床上常用的有胸部影像学检查、细菌学检查、血清学诊断、细胞因子检测、分子诊断等，但是每种方法都有一定的局限性，仍有大量的菌阴肺结核未能获得早期、快速的诊断。血清学检测因其简单、价廉、无需精密仪器，在基层医院就可以开展等优点，目前国内临床上常用于结核病的辅助诊断，尤其是对于那些诊断困难的菌阴肺结核、儿童结核病或肺外结核病具有实用价值，但其灵敏度或特异性仍不能满足临床诊断的需求。为了提高血清学检测的灵敏度，目前检测的标本也有采用胸水、脑脊液、腹水，以提高结核性胸膜炎、结核性脑膜炎、结核性腹膜炎诊断的灵敏度。但目前国内外尚未见专门用于检测尿液标本中抗结核抗体的试剂盒。目前已发现不同结核病患者标本对不同结核分枝杆菌抗原产生不同水平的抗体，而同一个患者在疾病的不同阶段对不同抗原的免疫反应也不同，使得每一位患者血清识别抗原的种类、数目和水平都有很大的差异，抗原识别的个体差异是人类结核病体液免疫的主要特性。因此，本发明拟制备一种新的结核分枝杆菌重组蛋白抗原OTC，应用化学发光酶免疫分析法检测血液或尿液中的抗结核OTC抗体水平，与其它血清抗体检测起互补作用，从而提高抗结核抗体检测的灵敏度，提高结核病人的发现率。此外，尿液标本来源方便，避免抽血化验给患者的痛苦，填补了国际空白。

发明内容

本发明的目的是为克服已有技术的不足，提供一种新型结核分枝杆菌特异性重组蛋白OTC及其制备方法，并应用该蛋白作为结核病抗体检测抗原制备血清或尿液结核OTC抗体化学发光酶免疫检测试剂盒，可与其它血清抗体检测起互补作用，以提高抗结核抗体检测的灵敏度。应用于结核病的快速诊断时，尿液标本来源方便，避免抽血化验给患者的痛苦。

一种结核分枝杆菌特异性重组蛋白OTC，它的核苷酸序列(DNA序列)如序列表中序列1所示。

OTC(ornithine carbamoyltransferase)蛋白抗原是一种鸟氨酸氨基甲酰转移酶，蛋白分子量为33025.2Da，参与鸟氨酸的生物合成。它存在于结核分枝杆菌培养滤液、细胞壁和细胞裂解液中，在活动性肺结核患者血液和尿液中高表达。重组OTC蛋白可被活动性结核病患者IgG抗体识别，而健康人IgG不能识别。因此，重组OTC蛋白用于血清或尿结核抗体检测，可与其它血清抗体检测起互补作用，以提高抗结核抗体检测的灵敏度，实现结核病患者的早期发现。

本发明提出的结核分枝杆菌特异性重组蛋白OTC，是通过基因工程技术将其克隆、表达、纯化。

本发明提出上述重组蛋白OTC的制备(构建)方法，包括如下步骤：

(1)OTC蛋白的克隆：通过基因工程技术进行克隆。