[发明专利]一种诱导DC细胞成熟的苦荞提取物、培养基及诱导方法

权利要求书

1.一种苦荞提取物的提取方法，包括：

提取苦荞种子所含蛋白质；

Resource Q阴离子交换层析；和

Sephadex G75凝胶过滤层析，

获得包含分子量60～65kD的蛋白质的层析馏分，所述层析馏分为所述苦荞提取物。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述苦荞种子为山西苦荞黑风一号的种子及其种植获得的苦荞种子。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述提取苦荞种子所含蛋白质的步骤包括：

将烘干的所述苦荞种子脱壳粉碎；

将粉碎后的所述苦荞种子用醋酸盐缓冲液在4℃下抽提；

离心除去沉淀；

将离心后的上清液用硫酸铵沉淀，优选使得硫酸铵的饱和度达到80％；和

将得到的沉淀用缓冲液溶解后透析，得到所述苦荞种子所含蛋白质。

4.一种苦荞提取物，所述苦荞提取物由如权利要求1至3中任一项所述的方法获得。

5.如权利要求4所述的苦荞提取物，具有植物凝集素的活性。

6.一种诱导树突状细胞成熟的培养基，包含如权利要求4或5所述的苦荞提取物。

7.如权利要求6所述的培养基，进一步包含RPMI-1640培养基、rhIL-4、rhGM-CSF和胎牛血清。

8.如权利要求6或7所述的培养基，其中在所述培养基中所述苦荞提取物中分子量为60～65kD的蛋白质的终浓度为45～55μg/mL，优选50μg/mL。

9.一种诱导树突状细胞成熟的方法，所述方法包括用如权利要求6至8中任一项所述的诱导树突状细胞成熟的培养基诱导培养2～3天，优选2天。

10.如权利要求9所述的诱导树突状细胞成熟的方法，在用所述诱导树突状细胞成熟的培养基培养之前，进一步包括：

在含10％FCS的RPMI-1640培养基中加入含DC的外周血单个核细胞和诱导因子rhIL-4和rhGM-CSF，培养到第7～8天，优选第7天时使用所述诱导树突状细胞成熟的培养基。