[发明专利]一种从鳀鱼中分离的活性多肽

权利要求书

1.一种活性多肽，其特征在于，所述的活性多肽的制备方法包括如下的步骤：

1)将鳀鱼浓缩液加入2～6倍体积的水后，再加入鳀鱼浓缩液重量1～8％的蛋白酶，在40～70℃下酶解2～24h制成酶解液；

2)在步骤1)的酶解液中加入鳀鱼酶解液重量1％～10％的麸皮，灭菌后接入米曲霉发酵3～7d获得发酵液；

3)将步骤2)制备的发酵液过滤，滤液灭菌后得到鳀鱼发酵母液成品；

4)将步骤3)得到的鳀鱼发酵母液成品进行冷冻干燥成干粉后，再用超纯水溶解，溶解液通过滤膜过滤后，滤液用葡聚糖G-15进行分离，上样量为0.2～2mL，以蒸馏水为洗脱液，流速为0.2～2mL/min，检测波长为220nm，分管收集洗脱27～30min的洗脱液；

5)将步骤4)得到的洗脱液浓缩后用DEAE-Sepharose FF离子交换柱层析进行分离纯化：浓缩后的样品上pH7.5～8.5的5mM Tris-HCl缓冲液平衡的DEAE-Sepharose FF离子交换柱，采用浓度为2mol/L NaCl梯度洗脱，流速为0.2～2mL/min，检测波长为220nm，分管收集洗脱3～6min的洗脱液；

6)将步骤5)得到的洗脱液组份过SB-C₁₈半制备柱，柱温25℃，上样量20～100μL，紫外波长220nm，流速0.5～2mL/min，流动相A为乙腈，流动相B中含0.1～1％的三氟乙酸；分管收集12～13.5min的洗脱液，干燥后即为活性多肽。

2.如权利要求1所述的活性多肽，其特征在于，所述的步骤1)中鳀鱼浓缩液是将鳀鱼或鳀鱼加工的副产物粉碎，过滤除去杂质后，滤液在80～100℃加热0.5～10h至粘稠半固态状得到的。

3.如权利要求1所述的活性多肽，其特征在于，所述的步骤1)中的蛋白酶为植物蛋白酶、动物蛋白酶、微生物蛋白酶中的任一种或几种。

4.如权利要求3所述的活性多肽，其特征在于，所述的植物蛋白酶为木瓜蛋白酶和/或菠萝蛋白酶。

5.如权利要求3所述的活性多肽，其特征在于，所述的动物蛋白酶为胃蛋白酶和/或胰蛋白酶。

6.如权利要求3所述的活性多肽，其特征在于，所述的微生物蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶和/或链霉菌蛋白酶。

7.如权利要求1所述的活性多肽，其特征在于，所述的多肽分子量为2,181Da。

8.权利要求1所述的活性多肽的纯度测定方法，其特征在于，所述的测定方法是将活性多肽用4.6×250nm的XDB-C₁₈分析柱测定纯度；其流速为0.5～2mL/min，其中流动相A为甲醇，流动相B为水。

9.权利要求1所述的活性多肽在制备抗神经细胞损伤制品中的应用。

10.一种抗神经细胞损伤制品，其特征在于，所述的制品包含有药理有效浓度的权利要求1所述的活性多肽。