[发明专利]纤维酶体基因的改建方法及获得的新型纤维素酶

权利要求书

1.一种纤维酶体基因的改建方法，其特征在于，所述方法包括克隆目标基因、删除单体酶上的冗余序列、嫁接纤维素结合域步骤。

2.根据权利要求1所述的一种纤维酶体基因的改建方法，其特征在于，所述克隆目标基因步骤为：以纤维酶体的支架蛋白的编码基因为模板，通过PCR扩增其中的编码纤维素结合域的基因片段cbd。

3.根据权利要求1所述的一种纤维酶体基因的改建方法，其特征在于，所述删除单体酶上的冗余序列步骤为：删除celD中编码锚定域的碱基序列，得到基因片段celD-d。

4.根据权利要求1所述的一种纤维酶体基因的改建方法，其特征在于，所述嫁接纤维素结合域步骤为将基因片段cbd融合到celD-d的尾部，得到基因celD-d+cbd。

5.根据权利要求2所述的一种纤维酶体基因的改建方法，其特征在于，所述基因片段cbd的上游带有1个链接片段，编码10-60个氨基酸，在酶的主体与纤维素结合域之间起链接作用，融合有该链接片段的cbd序列称之为Lcbd。

6.一种通过基因改建获得的新型纤维素酶NcelD，其特征在于，所述新型纤维素酶NcelD由基因celD-d+Lcbd编码，其肽链不带有与纤维酶体支架蛋白上的粘粒模块相吸附的锚定域、带有1段链接短肽、具有嫁接的纤维素结合域片段。

7.根据权利要求6所述的一种通过基因改建获得的新型纤维素酶NcelD，其特征在于，所述新型纤维素酶NcelD是能够结合纤维素的独立酶，不需要也不结合支架蛋白，水解纤维素的活性比自然单体酶CelD高。

8.一种新型纤维素酶NcelD的超量表达方法，其特征在于，以大肠杆菌表达系统pHsh的质粒为表达载体，表达质粒命名为pHsh-NcelD。