[发明专利]利用雪铁芋复叶轴高效生产原球茎的方法

权利要求书

1.一种利用雪铁芋复叶轴高效生产原球茎的方法，其特征在于，包括雪铁芋预培养、配制培养基、接种、原球茎培养过程，具体操作步骤如下：

步骤一：雪铁芋预培养

将栽植在花盆中的雪铁芋放置在用高锰酸钾和甲醛熏蒸消毒过的房间中，将植株用黑塑料袋套上，促使其茎叶徒长，30天后，剪取徒长的雪铁芋复叶备用。

步骤二：配制培养基

将玉米棒用粉碎机粉碎成5毫米～10毫米颗粒，在高压蒸汽灭菌锅中121℃高温消毒15分钟～20分钟。取容积为200毫升的组培瓶，每瓶加入消毒后的玉米棒颗粒15毫米～20毫米高。

将粗茎鳞毛蕨Dryopteris crassirhizoma Nakai用组织破碎机打成汁液后静置10分钟～20分钟，取上清液备用。

每1000毫升蒸馏水中，添加粗茎鳞毛蕨上清液100毫升～200毫升，5克～6克琼脂，10克～20克蔗糖，放在容器中搅拌均匀并煮沸后，灌装在200毫升的组培瓶中，每瓶装培养液约30毫升～50毫升，让培养液面高于玉米棒颗粒。

然后将装有培养基的组培瓶放在蒸汽灭菌锅中121℃高温消毒15分钟～17分钟，拿出放在无菌室冷却后备用。

步骤三：接种

在无菌操作室，将雪铁芋复叶轴用浓度为75％的酒精浸泡10秒～30秒，再用0.1％升汞浸泡10分钟～15分钟，然后用无菌蒸馏水冲洗3～5遍。用组织破碎机将消毒后的复叶轴打成汁液，接种至组培瓶中，每瓶滴入雪铁芋汁液3～5滴，每滴1～2ml。

步骤四：原球茎培养

将接种后的培养瓶放在无菌培养室中，每天200～500Lx光照培养10小时～15小时，无光照培养9～14小时；每天温度15℃～20℃，培养10小时～12小时，23℃～27℃培养12小时～14小时；培养10天～20天后有明显的愈伤组织生成。待愈伤组织生长为接种滴液的2～3倍时，将每天培养光照调整为500～1200Lx，10小时～15小时，无光照培养9小时～14小时；每天20℃～22℃培养12小时～14小时，25℃培养10小时～12小时；继续培养4周后，每块愈伤组织会分化出2～6个原球茎。