[发明专利]同时检测两种急性白血病标志物电化学传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种同时检测两种急性白血病标志物电化学传感器的制备方法及应用，属于临床分析及生物电化学传感技术领域。

背景技术

在当今社会中，癌症是严重威胁人类身体健康的疾病之一。癌症患者的死亡率很高的最主要的原因是，不能进行早期诊断，如果能早期诊断及时治疗，1/3的癌症可以治愈。而血清肿瘤标志物的测定对癌症的早期诊断起着重要的作用。因此，建立准确、快速检测血清中肿瘤标志物的分析方法及相应的设备引起了人们的高度重视。

急性白血病是儿童和青年中最常见的一种恶性肿瘤，对儿童身体健康的危害极大，其早期诊断对有效治疗具有十分重要的意义。传统诊断方法多依靠肿瘤组织或细胞形态上的变化来进行的，但判断难度大、准确率低，而且一旦在组织及细胞形态上确定癌症发生，往往已进入中晚期，难以进行有效治疗。由于癌细胞变化的过程主要是由复杂的分子水平的变化所诱导的，因此研究分子水平上的差异，对此水平的标志性物质进行灵敏及特异性识别和检测，有望实现癌症的高效早期诊断。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时检测两种急性白血病标志物电化学传感器的制备方法及应用。

本发明所采用的技术解决方案是：

一种同时检测两种急性白血病标志物电化学传感器的制备方法，包括以下步骤：

(1)将溶菌酶报告探针和γ-干扰素报告探针分别在含有三(2-氯乙基)磷酸酯的溶液中静置，以打开二硫键；再向溶液中添加溶菌酶适体和γ-干扰素适体，溶菌酶报告探针和溶菌酶适体形成溶菌酶报告探针-适体双链结构，γ-干扰素报告探针和γ-干扰素适体形成γ-干扰素报告探针-适体双链结构；

(2)对金电极进行预处理，将处理好的金电极浸在经过步骤(1)预处理后的溶菌酶报告探针-适体双链和γ-干扰素报告探针-适体双链混合液中，室温静置过夜，之后用二次蒸馏水和清洗液清洗；

(3)将步骤(2)处理后的电极浸在含有6-巯基-1-己醇的溶液中，以封闭电极，之后用二次蒸馏水和清洗液清洗；

(4)将步骤(3)处理后的电极作为工作电极，和参比电极、对电极连接在化学工作站上，以得到可同时检测两种急性白血病标志物的电化学传感器。

优选的，步骤(1)中：所述溶菌酶报告探针为5’-巯基-C6-GTGCAGAGCTAAGTAACTCTGCAC-亚甲基蓝-3’，所述溶菌酶适体为5’-ATC AGG GCT AAA GAG TGC AGA GTT ACT TAG-3’，所述γ-干扰素报告探针为5’-巯基-C6-TTCAACCAACTTTTTTTTTTCAACACCCAT-二茂铁-3’，所述γ-干扰素适体为5’-GGG GTT GGT TGT GTT GGG TGT TGT GT-3’。

优选的，步骤(1)中：所述溶液中溶菌酶报告探针-适体双链的浓度为1μmol/L，γ-干扰素报告探针-适体双链的浓度为1μmol/L；所述溶液中含有0.5μL10mmol/L三(2-氯乙基)磷酸酯，还含有20mmol/L Tris-HCl、140mmol/L NaCl、20mmol/L MgCl₂以及20mmol/L KCl，溶液pH值为7.4。

优选的，步骤(1)中：所述静置过程在室温下进行，静置时间为2小时。

优选的，步骤(2)中所述金电极的预处理过程如下：金电极用0.3μm的Al₂O₃粉打磨成镜面，二次蒸馏水清洗后，相继在二次蒸馏水和乙醇溶液中超声50s；将清洗干净的金电极在0.5mol/L的硫酸溶液中循环伏安扫描至稳定，扫描电压为0.2～1.65V，扫描速度为0.1V/s，然后用二次蒸馏水冲洗干净，室温晾干。

优选的，步骤(3)中：所述溶液中MCH的浓度为2mmol/L，溶液中还含有20mmol/L Tris-HCl、140mmol/L NaCl、20mmol/L MgCl₂以及20mmol/L KCl，溶液pH值为7.4。

优选的，步骤(2)与步骤(3)中：所述清洗液为浓度10mmol/L的Tris-HCl缓冲溶液，溶液pH值为7.4。

上述制备的电化学传感器用于两种急性白血病标志物溶菌酶和γ-干扰素的同时检测。

上述检测方法具体包括以下步骤：