[发明专利]一种河豚毒素柱前衍生-高效液相荧光检测方法及基于该方法的试剂盒

权利要求书

1.一种河豚毒素柱前衍生-高效液相荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1) 制备待测品的样品溶液及河豚毒素标准品溶液；

(2) 荧光衍生：取样品溶液0.4m L，加入0.2m L pH维持液，将溶液pH控制在11.6~11.9区间，然后加入0.1mL衍生试剂1和0.1mL衍生试剂2，混匀，水浴加热20min，冷却至室温，加入0.1mL终止液，使溶液pH呈中性，而后用超纯水定容；取样品溶液，加入河豚毒素标准品溶液混匀，然后进行本步骤操作进行荧光衍生；

(3) 定性和定量检测：采用配备荧光检测器的液相色谱仪对步骤(2)荧光衍生后的样品溶液和河豚毒素标准品溶液进行分析，对样品溶液中的河豚毒素进行定性和定量。

2.根据权利要求1所述的河豚毒素柱前衍生-高效液相荧光检测方法，其特征在于，所述步骤(1) 河豚毒素标准品溶液中河豚毒素浓度为20~10000ng/ml。

3.根据权利要求1或2所述的河豚毒素柱前衍生-高效液相荧光检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中pH维持液为2mol/L碳酸钠溶液。

4.根据权利要求3所述的河豚毒素柱前衍生-高效液相荧光检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中衍生试剂1的 pH约为12，包括a液、b液和c液，a液、b液和c液之间的体积比为5﹕2﹕3，具体地，所述a液为次溴酸钠贮备液：0.67g溴酸钠、3.0 g溴化钠，用蒸馏水溶解并定容至10mL；所述b液为 5mol/L盐酸；所述c液为 4.81mol/L氢氧化钠。

5.根据权利要求4所述的河豚毒素柱前衍生-高效液相荧光检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中衍生试剂2为20%尿素。

6.根据权利要求5所述的河豚毒素柱前衍生-高效液相荧光检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中终止液为15%磷酸。

7.根据权利要求1所述的河豚毒素柱前衍生-高效液相荧光检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中高效液相色谱检测条件为：色谱柱：反相C-18柱；流动相：50 mmoL/L磷酸二氢铵；检测信号：激发波长233 nm，发射波长370 nm。

8.一种基于权利要求1所述的河豚毒素柱前衍生-高效液相荧光检测方法用试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：

(1) 衍生试剂1：pH约为12，包括a液、b液和c液，a液、b液和c液之间的体积比为5﹕2﹕3，所述a液为次溴酸钠贮备液：0.67g溴酸钠、3.0 g溴化钠，用蒸馏水溶解并定容至10mL；所述b液为 5mol/L盐酸溶液；所述c液为 4.81mol/L氢氧化钠溶液；

(2) 衍生试剂2：20%尿素溶液；

(3) pH维持液：2mol/L碳酸钠溶液；

(4) 河豚毒素标准品贮备液：100μg/mL河豚毒素溶液，内含1mmol/L的柠檬酸盐，pH=5.0；

(5) 终止液：15%磷酸溶液。