[发明专利]不结球白菜自交不亲和鉴定的SSR分子标记及其应用

说明书

技术领域

本发明属于作物遗传育种与生物技术领域，具体涉及不结球白菜自交不亲和基因连锁的SSR分子标记及用应用。

背景技术

不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)俗称青菜，小白菜，属于十字花科芸薹属芸薹种，是我国主要的叶菜类蔬菜。具有适应性强，生长期短、品质柔嫩、风味独特、营养丰富等特点，是我国南方人民终年喜食的大众化蔬菜，在蔬菜周年供应中占有重要地位。每年播种面积约800万亩，占长江中、下游地区蔬菜复种面积的30～40％。近年来不仅北方大量引种栽培，在东南亚、日本、美国及欧洲等国家和地区也广泛引种，逐渐成为世界性的蔬菜。

作为异花授粉作物，不结球白菜具有典型的自交不亲和性，杂种优势显著。为了提高不结球白菜的产量和品质，生产上多采用杂种一代进行制种。20世纪70年代中期，北京、上海、山东等地区开始应用自交不亲和系配制杂种进行白菜生产，取得了显著增产效果。利用自交不亲和系进行不结球白菜生产，可以获得较高的F1代杂交种产率，不会产生不良的胞质缺陷。因此自交不亲和育种是目前不结球白菜种质资源繁育的重要途径之一。但是对于自交不亲和性的鉴定存在较大难度。传统的检测方法包括荧光显微镜检法、亲和指数法等，需要在花期或结种后进行检测，周期长，操作繁琐，耗费大量的人力和物力，效率较低。

分子生物技术的飞速发展，特别是分子标记技术的建立和成熟，为作物的品种鉴定和遗传多样性分析提供了简单快捷的方法。分子标记辅助育种可以大大加快不结球白菜自交不亲和系的育种进程，提高育种效率。常用的分子标记包括SSR、AFLP、RAPD和AFLP等。其中SSR标记由于具有数量丰富、多态性高、重复性好等诸多优点，在生产科研领域被广泛应用。但是目前国内外关于不结球白菜自交不亲和分子标记的研究较少。史公军(不结球白菜自交不亲和基因的分子标记，硕士论文，南京农业大学，2001)利用RAPD标记获得了一个与不结球白菜自交不亲和性相关的分子标记，其遗传距离为7.54cM。由于RAPD标记为显性标记，不能区分杂合基因型和纯和基因型，并且操作繁琐，重复性和稳定性较差，无法用于实际生产中不结球白菜自交不亲和性的检测。目前关于不结球白菜自交不亲和基因连锁SSR分子标记的获得方法与应用未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对不结球白菜育种中亲和指数法的缺陷，如检测周期长、工作量大、容易受环境条件限制等，提供一种能够对苗期不结球白菜进行自交不亲和性检测的SSR分子标记，从而对不结球白菜植株的自交不亲和性进行快速鉴定，加快不结球白菜分子标记辅助育种进程。

本发明的目的可以通过以下措施达到：

一种不结球白菜自交不亲和鉴定的SSR分子标记或者引物组合物，其特征在于其标记引物为Na12E02、KBRH138G23或BrSS15中的至少一种，其中

标记引物Na12E02为：

正向引物：5’-TTGAAGTAGTTGGAGTAATTGGAGG-3’，

反向引物：5’-CAGCAGCCACAACCTTACG-3’；

标记引物KBRH138G23为：

正向引物：5’-TTTGACATCGTGCAATGCTA-3’，

反向引物：5’-TTGGGCTGGTCCTGAAGATA-3’；

标记引物BrSS15为：

正向引物：5’-CCATTCGCGAGGTTAGATTC-3’，

反向引物：5’-ACACAGCCACATCAAACCAA-3’。

本发明中优选的标记引物为BrSS15。

本发明的SSR分子标记的引物组合物可以应用在不结球白菜自交不亲和基因鉴定方面。该应用可包括如下步骤：通过PCR扩增育种分离世代材料的DNA，如果能够扩增出150bp片段、380bp片段或240bp片段中的至少一种，则标志着不结球白菜自交不亲和基因的存在。特别是对于标记引物Na12E02，在扩增时如果能够扩出150bp片段，则标志着不结球白菜自交不亲和基因的存在；对于标记引物KBRH138G23，对不结球白菜DNA进行扩增时，如果能够扩出380bp片段，则标志着不结球白菜自交不亲和基因的存在；对于标记引物BrSS15，对不结球白菜DNA进行扩增，如果能够扩出240bp片段，则标志着不结球白菜自交不亲和基因的存在。

本发明中所述的育种分离世代材料为近等基因系获得的高度分离的F2后代群体或者高度分离的BC₁后代群体。