[发明专利]一种海洋微生物来源的低温偏甘油酯脂肪酶及其应用

权利要求书

1.一种海洋微生物来源的低温偏甘油酯脂肪酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.一种偏甘油酯脂肪酶基因，其特征在于，基因序列如SEQ ID NO:1所示。

3.包含权利要求2所述基因的表达载体。

4.一种细胞，其特征在于，包含权利要求3所述的载体，或其基因组中整合有权利要求2所述的脂肪酶基因。

5.一种偏甘油酯脂肪酶重组菌株的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备偏甘油酯脂肪酶表达质粒：

a.人工合成权利要求2的基因序列；

b.将上述扩增基因PCR产物经DNA纯化后，限制性内切酶Kpn I和SalI分别对纯化的基因片段和质粒pGAPZαA进行双酶切消化，连接，转化至大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞，得到脂肪酶表达质粒；

(2)利用表达质粒制备重组菌株：

a.将步骤(1)的脂肪酶表达质粒经限制性内切酶Bln I线性化后，电转至宿主细胞；

b.将转化液涂布于含有100mg/ml Zeocin的YPD平板中，30℃培养3天后，平板上长出酵母单菌落为重组菌株。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述PCR的引物序列如下：

MAJ1 For5’-TACTGGTACCGCCACCGTCGCTGCTGATCCC-3’

MAJ1 Rev5’-AGCTCTCGAGTCAGTGATGGTGGTGATGGTG-3’。

7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述宿主细胞为巴斯德毕赤酵母X-33(Pichia pastoris)。

8.权利要求5或6或7所述的方法制备的重组菌株。

9.权利要求1所述脂肪酶的应用，其特征在于，该脂肪酶用于催化甘油酯的水解或合成甘油二酯，或用于植物油精炼过程中的酶法脱胶。

10.一种生产权利要求1所述的脂肪酶的方法，其特征在于，包括：培养权利要求4所述的细胞，从培养物中分离出表达产物。