[发明专利]一种重组伪狂犬病病毒及其构建方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于动物病毒基因工程技术领域，具体涉及一种重组伪狂犬病病毒及其构建方法和应用。 

背景技术

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)属于疱疹病毒(Herpesviridae)α疱疹病毒亚科(Alpha-herpesvirinae)水痘病毒属(Varicello virus)的疱疹病毒I型(Porcine herpesvirus Type I)，能引发猪的严重疾病。伪狂犬病在猪常呈爆发性流行，对妊娠母猪的危害尤其严重，常引起死胎、流产、木乃伊；后备母猪和空怀母猪感染病毒后可引起不育症，不发情、返情和屡配不孕。公猪感染后表现为睾丸肿胀、萎缩，失去种用能力。新生仔猪感染PRV后大量死亡，15日龄以内死亡率可达100％，3～4周龄仔猪的死亡率可达30％～40％。育肥猪感染伪狂犬病毒后，则表现为发热，呼吸道症状以及生长迟缓，影响增重，降低饲料报酬。除猪以外的其它动物发生该病表现为发热、奇痒及脑脊髓炎症状，均以死亡而告终，但表现为散发或呈地方性流行。同时，猪既是伪狂犬病病毒的贮存者，也是伪狂犬病毒的传染源，控制猪伪狂犬病不仅对养猪业本身，而且对其它动物养殖的顺利发展也有着十分重要的意义。疫苗免疫接种是预防控制与消灭伪狂犬病的根本措施。目前市售的PRV疫苗绝大多数为具有鉴别诊断能力的活疫苗，有匈牙利的天然弱毒Bartha-K/61株疫苗产品，及四川农大郭万柱教授主持研发的猪伪狂犬病活疫苗(SA215株)和华中农业大学陈焕春教授主持研发的 猪伪狂犬病活疫苗(HB98株)。该类疫苗已投放市场使用多年，对猪伪狂犬的预防与控制发挥了重要作用。SA215株与HB98株均为基因工程活疫苗毒株，即采用分子生物学方法缺失其母本病毒的主要毒力基因(如TK)与非必须糖蛋白基因(如gE、gI)，使其毒力大大降低，并具有鉴别诊断能力，为猪伪狂犬病的控制做出了巨大贡献。 

自1991年在加拿大北部猪群中出现由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus Type2，PCV2)感染引起的PMWS以来，全球的绝大多数国家和地区均相继有PCV2感染及导致的疾病的报道。PCV2感染不仅引起PMWS、PDNS等PCV2相关疾病，感染猪死亡率高，而且其主要病毒特征为淋巴系统损伤和免疫缺陷，造成感染猪对其它病原的易感性增高，因此，PCV2感染给各国养猪业造成了极大的经济损失和潜在危险，成为了严重危害世界养猪业的重大传染病。 

在我国，通过血清学和流行病学调查证实PCV2感染相当严重，全国各省(市)的大小猪场均存在PCV2感染。2002年由PCV2感染引起的PMWS在全国各地呈暴发流行，给我国养猪业造成了巨大经济损失，己成为我国规模化猪场危害养猪生产的重要免疫抑制性疫病之一。据2011年各科研院所的检测结果发现，我国猪场的PCV2阳性率已达100％，具有流行范围广、各生长阶段猪感染严重、混合感染突出等特点，严重威胁我国养猪业的发展。PCV2对养猪业的另一影响为其感染可导致其它疫苗免疫时的免疫效力显著降低。 

由于PCV2感染细胞后不表现细胞病变、病毒增殖滴度低，为疫苗的研制造成了极大的困难。直至2007年，全球第一个PCV2疫苗即梅里亚在欧盟被批准上市，随后先后有英特威Circumvent^TM、富道Suvaxyn及勃林格CircoFLEX^TM上市，但仅勃林格CircoFLEX^TM在我国成功获批上市。2010年后，我国先后有5个PCV2全病毒灭活疫苗批准上市。该类疫苗由于生产成 本高，价格昂贵，仔猪用疫苗每头份10～14元，按免疫两次计算，每头仔猪的费用至少30元，母猪用疫苗每头份至少30元，一般至少免疫3次，每头猪的费用为90元以上，由此可见，该类疫苗的使用大大提高了养猪的成本。 

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种重组伪狂犬病病毒，应用于活疫苗中具有高安全性和有效性。 

本发明的另一目的在于提供一种重组伪狂犬病病毒的构建方法，通过分子生物学手段获得一种重组伪狂犬病病毒。 

本发明的另一方法在于提供重组伪狂犬病病毒在制备猪伪狂犬病与猪圆环病毒2型疫苗中的应用。 

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：