[发明专利]一种表柔比星诱导建立的乳腺癌多药耐药性细胞株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种表柔比星诱导建立的乳腺癌多药耐药性细胞株，其保藏编号为：CCTCC C201439。

2.一种乳腺癌多药耐药性细胞株的构建方法：

（1）将人乳腺癌MDA-MB-231细胞株常规培养于含有100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素和10%胎牛血清的DMEM培养液中,置于37℃、5% C0₂、95%湿度培养箱中维持培养；

（2）培养至70%-90%贴壁率时，弃上清，加入表柔比星，使其作用浓度为0.05-0.07mg/l，在37℃、5% C0₂、95%湿度条件下继续培养，24小时后换入新鲜的培养液，继续培养，历经6-8周，细胞稳定生长，传代2次；

（3）适当增加表柔比星的作用浓度，在37℃、5% C0₂、95%湿度条件下继续培养，24小时后换入新鲜的培养液，继续培养，历经6-8周，细胞稳定生长，传代2次；

（4）重复步骤（3），直到获得能在含5.5-6.5mg/l表柔比星的培养体系中稳定生长、传代及复苏的MDA-MB-231/EPI细胞株。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于：所述适当增加表柔比星的作用浓度是采用0.05-0.07mg/l、0.1-0.15mg/l、0.2-0.3mg/l、0.4-0.6mg/l、0.8-1.2mg/l、1.8-2.5mg/l、3.5-4.5mg/l、5.5-6.5mg/l这8个浓度梯度。

4.权利要求1所述的多药耐药性细胞株在耐表柔比星、紫杉醇、依托泊苷、顺铂中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述多药耐药性细胞株耐表柔比星的指数为26.27倍、耐紫杉醇的指数为12.261倍、耐依托泊苷的指数为1.739倍、耐顺铂的指数为3.834倍。