[发明专利]一种杂交瘤细胞及其产生的单克隆抗体和应用

权利要求书

1.一种杂交瘤细胞，其特征在于，保藏编号为CGMCC NO.9153。

2.根据权利要求1所述杂交瘤细胞，其特征在于，由以下方法制备获得：

SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的蛋白免疫BALB/C小鼠，3天后取BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞按照5∶1～10∶1的比例混合，利用PEG进行细胞融合，融合后进行HAT培养，然后吸取杂交瘤细胞培养上清液进行ELISA检测，筛选出阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆至能稳定分泌抗SEQ ID NO:1所示氨基酸序列蛋白单克隆抗体，获得所述单克隆抗体杂交瘤细胞。

3.根据权利要求2所述杂交瘤细胞，其特征在于，所述SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的蛋白免疫BALB/C小鼠具体为：

取SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的蛋白100μg加等质量福氏完全佐剂对BALB/C小鼠进行第一次皮下注射，21天后取SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的蛋白300μg加等质量福氏不完全佐剂对BALB/C小鼠进行第二次皮下注射，10天后尾部采血并用ELISA间接法测定抗SEQ ID NO:1所示氨基酸序列蛋白的鼠血清效价，选择效价高的BALB/C小鼠用SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的蛋白100μg进行免疫。

4.保藏编号为CGMCC NO.9153的杂交瘤细胞在制备抗SEQ ID NO:1所示氨基酸序列蛋白单克隆抗体中的应用。

5.一种抗SEQ ID NO:1所示氨基酸序列蛋白单克隆抗体，其特征在于，由保藏编号为CGMCC NO.9153的杂交瘤细胞分泌产生。

6.权利要求5所述单克隆抗体在制备治疗血栓性疾病或凝血性疾病药物中的应用。

7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述血栓性疾病为冠脉综合征或深静脉血栓。

8.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述凝血性疾病为弥散性血管内凝血病。

9.权利要求5所述单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、用不完全佐剂免疫BALB/C小鼠1～2周后，分别往小鼠腹腔注射1×10⁶个保藏编号为CGMCC NO.9153的杂交瘤细胞，接种所述杂交瘤细胞7～10天后产生腹水；

步骤2、从所述BALB/C小鼠腹腔抽取腹水，置于15ml离心管中，2000rpm离心10min，以沉淀血细胞及其它杂质，将上清转移入新的离心管中，放入-80℃冰箱保存，纯化前，使用0.1M的PBS溶液按1:3的比例稀释腹水；

取0.5ml Protein G装入吸附柱中，加入20倍柱体积的0.1M的PBS缓冲液平衡柱子，以备上样；

取稀释的腹水，加入纯化柱中，每次2-3ml，腹水循环过柱3遍；

步骤3、待腹水循环过柱3遍后，加上30倍柱体积的0.1M的PBS缓冲液充分洗涤柱子，洗掉杂蛋白；

洗涤完毕后，加0.1M、pH值为2.8的Gly洗脱液洗脱结合的抗体，预先在收集管中加入25ul1M、pH值8.9的Tris-Hcl，每管收集500ul的洗脱液，连续收集10管；

使用显色液测定每管收集液是否含有蛋白质，取蛋白含量最多的收集液进行透析，透析后获得抗SEQ ID NO:1所示氨基酸序列蛋白蛋单克隆抗体。