[发明专利]一种苯乙醛还原酶突变体在审
| 申请号： | 201410185390.4 | 申请日： | 2014-05-04 |
| 公开（公告）号： | CN103923889A | 公开（公告）日： | 2014-07-16 |
| 发明（设计）人： | 陈依军;刘楠;易登欢 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12P7/62;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 张铂 |
| 地址： | 211198 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 乙醛 还原酶 突变体 | ||
1.一种催化活性提高的苯乙醛还原酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4、6或8所示。
2.如权利要求1所述的苯乙醛还原酶突变体作为催化剂在手性化合物合成中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述手性化合物为(R)-α-氯代苯乙醇或(R)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯。
4.编码权利要求1所述的苯乙醛还原酶突变体的基因，其特征在于，其核苷酸序列序列如SEQ ID NO:3、5或7所示。
5.携带权利要求4所述基因的重组表达载体。
6.含有如权利要求5所述重组表达载体的工程菌。
7.构建权利要求6所述基因工程菌的方法，其特征在于，具体包括如下步骤
采用化学全合成或PCR方法克隆编码如权利要求4所述苯乙醛还原酶突变体的基因；
将步骤(1)获得的突变体基因连接到原核表达载体，获得重组表达载体；
将步骤(2)获得的重组表达载体转化至E.coli BL21(DE3)得到基因工程菌。
8.权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的表达载体为pET-22b(+)。
9.应用权利要求6所述的基因工程菌发酵生产苯乙醛还原酶突变体的方法，其特征在于，将基因工程菌经LB培养基活化后接种到发酵培养基中，于37℃、220rpm条件下培养至OD600值为0.6～1.0时，加入IPTG诱导苯乙醛还原酶突变体的表达。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，诱导过程中IPTG浓度维持在0.05～0.5mM范围内。
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