[发明专利]从玉米浆中提取生物素的方法及其薄层层析扫描检测方法

权利要求书

1.一种从玉米浆中提取生物素的方法，其特征在于：步骤如下：

(1)取玉米浆，加入1～2倍的N,N-二甲基甲酰胺，加热提取，提取温度为75℃～85℃，提取时间为1～2h，提取后过滤，得提取液和滤渣；用无水乙醇洗涤滤渣3～5次，过滤，合并滤液得乙醇洗涤液，每次无水乙醇的用量与玉米浆的体积相等；将提取液和乙醇洗涤液合并，过滤，滤液蒸发浓缩至玉米浆体积的8/10～6/10，得浓缩液；

(2)向步骤(1)所得浓缩液中加入3倍的无水乙醇，静置，过滤除去沉淀，滤液蒸发浓缩至玉米浆体积的4/10～3/10，得浓缩液；

(3)向步骤(2)所得浓缩液中加入4～5倍的丙酮，静置，过滤除去沉淀，滤液蒸发浓缩至玉米浆体积的2/10，得浓缩液；

(4)向步骤(3)所得浓缩液中加入3～4倍的丙酮，静置，过滤除去沉淀，蒸发浓缩至玉米浆体积的1/20，得浓缩液；

(5)步骤(4)所得浓缩液中加入乙酸丁酯和环己烷，乙酸丁酯、环己烷的加入量与浓缩液的体积相同，静置分层；取上清液，即为生物素溶液。

2.根据权利要求1所述的从玉米浆中提取生物素的方法，其特征在于：所述蒸发浓缩的温度为40～60℃。

3.一种生物素的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：步骤如下：

(1)取待检测样品液，点在硅胶板上，加入展开剂，在展开缸内展开，然后将薄层板拿出放在通风柜中晾干；同时，采用外标一点法点不同浓度的生物素标准品溶液，同时展开；

所述展开剂为二氯甲烷-氯仿-甲醇-冰乙酸混合液，其中，二氯甲烷、氯仿、甲醇、冰乙酸四者的体积比为3:3:2:0.06；

(2)将2,4-二甲氨基肉桂醛、硫酸和无水乙醇混合，配成染色液，其中2,4-二甲氨基肉桂醛终浓度为0.1～0.2％，硫酸终浓度为1～2％；展完后晾干的展板，用染色液喷雾染色，得到与背景对比明显的标准品的斑点和样品的斑点；

(3)利用薄层扫描仪以530nm吸收波长进行薄层层析扫描，照射灯为钨灯，检测计算得到生物素标准品溶液质量和峰面积积分值的关系的回归方程，然后根据样品液的峰面积积分值计算出样品液中生物素的质量浓度。

4.根据权利要求3所述的生物素的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：所述生物素标准品溶液包括浓度分别为0.05μg/μl，0.2μg/μl，0.25μg/μl，0.3μg/μl，0.4μg/μl的一系列标准品溶液。

5.根据权利要求3所述的生物素的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：所述回归方程Y＝65.2335+2.6355X，r＝0.99931,RSD＝1.88％。

6.根据权利要求3所述的生物素的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：所述样品液是通过以下方法制备得到的：(1)取玉米浆，加入1～2倍的N,N-二甲基甲酰胺，加热提取，提取温度为75℃～85℃，提取时间为1～2h，提取后过滤，得提取液和滤渣；用无水乙醇洗涤滤渣3～5次，过滤，合并滤液得乙醇洗涤液，每次无水乙醇的用量与玉米浆的体积相等；将提取液和乙醇洗涤液合并，过滤，滤液蒸发浓缩至玉米浆体积的8/10～6/10，得浓缩液；

(2)向步骤(1)所得浓缩液中加入3倍的无水乙醇，静置，过滤除去沉淀，滤液蒸发浓缩至玉米浆体积的4/10～3/10，得浓缩液；

(3)向步骤(2)所得浓缩液中加入4～5倍的丙酮，静置，过滤除去沉淀，滤液蒸发浓缩至玉米浆体积的2/10，得浓缩液；

(4)向步骤(3)所得浓缩液中加入3～4倍的丙酮，静置，过滤除去沉淀，蒸发浓缩至玉米浆体积的1/20，得浓缩液；

(5)步骤(4)所得浓缩液中加入乙酸丁酯和环己烷，乙酸丁酯、环己烷的加入量与浓缩液的体积相同，静置分层；取上清液，即为样品液。