[发明专利]一种毛蚶多糖的含量测定方法

权利要求书

1.一种毛蚶多糖的含量测定方法，其特征在于先用凝胶色谱柱高效液相色谱法确定被测样品中的多糖是毛蚶多糖，再用分光光度法测定含量。

2.根据权利要求1的凝胶色谱柱高效液相色谱法确定被测样品中的多糖是毛蚶多糖，其特征在于具体步骤如下：

（1）色谱条件及系统适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.1mol/L的硫酸钠溶液为流动相；示差折光检测器；柱温：40℃；流速：0.5ml /min；理论板数按葡萄糖峰计算应不低于5000；

（2）称取含毛蚶提取物约2g的样品，加15倍的石油醚：乙醇=1：1的溶液，于40℃水浴保温3hr，超声提取30min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水20ml，用氢氧化钠溶液调pH至7.5～8，80℃水浴3hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水20ml，继续水浴2hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加3倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水20ml ，80℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/4体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入3倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，制得毛蚶多糖；取毛蚶多糖，加流动相使溶解，制成每1ml含10mg的溶液；

（3）取毛蚶多糖供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定记录图谱；图谱中如果以图谱中的S峰为参照，呈现2个特征峰，且以S峰为1，2个特征峰的相对保留时间在峰1为0.56±10%、峰2为0.68±10%，其重均分子量（Mw）在6.88～9.47×105之间，则继续进行以下操作，如无则判为伪品。

3.根据权利要求1的毛蚶多糖的含量测定方法，其特征在于称取含毛蚶提取物约1-4g样品，精密称定，置圆底烧瓶中，加30-50倍水，加热回流1-3小时，用脱脂棉滤过，滤液移至50-150ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1-5ml，加5-10倍乙醇，搅拌，离心5-20分钟，沉淀加水溶解，置20-50ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1-5ml，加1/2体积的4%苯酚溶液，混匀，迅速加入硫酸5-10ml，摇匀，于30-50℃水浴中保温20-60分钟，取出，置冰水浴中2-10分钟，取出，即得毛蚶多糖供试品；取毛蚶多糖供试品溶液以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在488nm的波长处测定吸光度；从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的重量(mg)，计算含量。

4.根据权利要求1或权力要求3的一种毛蚶多糖的含量测定方法，其特征在于制剂中每g毛蚶提取物含毛蚶多糖不得少于24mg，含量越高，疗效更好。

5.根据权利要求1或权利要求2或权利要求3或权利要求4的一种毛蚶多糖的含量测定方法，其特征在于可用于毛蚶提取物各种制剂的含量测定。