[发明专利]一种海洋生物源超氧化物歧化酶提取分离工艺

说明书

技术领域

本发明涉及水产品的高值化开发技术领域，尤指从海洋生物源中提取分离超氧化物歧化酶产业化提取分离工艺。

背景技术

超氧自由基被公认为是人体细胞的“杀手”，参与了人类很多严重疾病的发生和发展过程，比如人体内O2-·的存在可直接导致癌细胞生长、辐射损伤、人体衰老、类风湿关节炎、肺气肿、老年性白内障、老年性骨关节病等疾病，另外像心脏病、糖尿病、红斑狼疮、甚至近年来蔓延很快的艾滋病，也都与超氧自由基有密切关系，是引起衰老、肿瘤等严重疾病的罪魁。而超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)则是生物体内预防氧毒性的关键性防线，是天然的超氧自由基的“克星”，其功能是清除O2-·，也是生物体内唯一清除O2-·的抗氧化酶类。SOD具有抗炎、抗病毒、抗辐射、抗衰老等作用，在病毒性疾病、自身免疫性疾病、心血管疾病、辐射病、癌和癌的放射治疗预防以及人类长寿等领域的研究中也己有突破性进展。目前在医学、化妆品、保健食品添加剂等方面得到了广泛的应用。

目前为止SOD产品来源方面主要还是以猪牛血、肝脏等动物组织为主，已建立了从动物血红细胞中分离纯化SOD 的多种方法。在传统SOD的提取纯化过程中，分别使用了大量的有机溶剂丙酮及无机盐硫酸铵，这些试剂的加入不仅影响酶的活性，而且对于试剂的浪费及后续的去除工艺，均提高了其产业成本。并且动物本身携带各种细菌病毒等，这就不可避免地容易发生一些交叉感染，过敏性反应等现象，特别是口蹄疫、疯牛病以及由动物传播的恶性传染病的蔓延，人们对于从猪、牛提取SOD等活性成分的安全性产生了质疑，生产动物源血液制品的风险加大，许多国家和地区抵制以动物血液及内脏为原料制取的超氧化物歧化酶，使得超氧化物歧化酶在国际市场上极为紧缺。

选择丰富合理的SOD来源，简化纯化步骤，降低成本，获得高比活力的SOD是生产SOD关键问题。伴随我国水产养殖业结构调整，水产加工业也逐步发展壮大，但加工鱼产品同时会产生大量下脚料，占加工鱼30%～50%，如果不进行有效处理，不仅污染环境，还造成大量资源浪费。鱼内脏中含有丰富的生物酶类，其中SOD活性较高，若以廉价而丰富的鱼内脏作为工业生产SOD的资源，简化分离纯化步骤，制备高附加值、市场前景广阔的SOD产品，实现废物利用，变废为宝，就显得颇为重要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于以海洋水产加工副产物鱼内脏为原料，提供一种高纯度海洋生物源超氧化物歧化酶提取分离工艺，通过该工艺可以获得更为安全高效的海洋生物源超氧自由基清除剂产品。

为实现上述目的，本发明的解决方案是：

一种海洋生物源超氧化物歧化酶提取分离工艺，其步骤包括：

步骤1、经匀浆处理的海洋水产加工副产物鱼内脏，按比例加入缓冲溶液，调节提取液pH至6.0～7.4，控制提取温度，搅拌提取2～6小时；

步骤2、提取液经加热处理去除杂蛋白，直接进入下一步工序；

步骤3、提取液冷却后经离心去除沉淀物，上清液通过多级超滤、微滤、纳滤多元膜集成纯化系统脱除大分子、分离提纯及浓缩，获得SOD粗品；

步骤4、SOD粗品经葡聚糖凝胶G-100与DEAE-FF层析联合分离纯化，后经干燥处理，获得高纯度海洋生物源SOD产品。

所述步骤1中，经匀浆海洋水产加工副产物鱼内脏与缓冲溶液的质量体积比，即千克：升，为1:2～1:10。

所述步骤1中，采用的缓冲溶液为0.05～0.3mol/L的Tris-HCL或磷酸缓冲溶液。

所述步骤1中，采用的缓冲溶液采用盐酸和氢氧化钠控制提取过程中提取液pH至6.0～7.4。

所述步骤1中，提取温度控制在60℃以下。

所述步骤1中，在缓冲溶液中加入铜、锌两种盐，铜离子浓度控制在0.2～20.0mmol/L，锌离子浓度控制在1～20.0mmol/L。

所述步骤1中所用的铜锌盐可为硫酸盐、盐酸盐或醋酸盐。

所述步骤2中，提取液通过加热去除部分杂蛋白，加热温度为60℃，时间控制在30～120分钟。