[发明专利]一种植物DNA的快速提取方法有效

专利信息
申请号: 201410188782.6 申请日: 2014-05-06
公开(公告)号: CN103966198A 公开(公告)日: 2014-08-06
发明(设计)人: 付小琼;叶武威;杨付新;王秀玲 申请(专利权)人: 中国农业科学院棉花研究所
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10;C12Q1/68
代理公司: 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 代理人: 关畅;任凤华
地址: 455000 河*** 国省代码: 河南;41
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摘要:
搜索关键词: 一种 植物 dna 快速 提取 方法
【权利要求书】:

1.植物DNA提取方法,包括下述步骤1)和2):

1)破碎植物器官和/或组织,得到植物粉末;

2)向所述植物粉末中加入细胞裂解液和溶液S在冰浴中反应15-40分钟,得到含有DNA的提取液,将该提取液称为提取液1,除去所述提取液1的杂质,得到DNA;

所述细胞裂解液由水和溶质组成,所述溶质及其浓度为0.1M Tris-HCl、0.02M EDTA钠盐、2%(质量百分含量)十六烷基三甲基溴化铵、2%(质量百分含量)聚乙烯吡咯烷酮、1.5M NaCl和1%(体积百分含量)β-巯基乙醇;

所述溶液S为溶液A或溶液B;

所述溶液A由苯酚、氯仿和异戊醇组成,所述溶液A中苯酚、氯仿和异戊醇的体积比为25:24:1;

所述溶液B由氯仿和异戊醇组成,所述溶液B中氯仿和异戊醇的体积比为24:1。

2.根据权利要求1所述的DNA提取方法,其特征在于:所述植物器官为种子,所述溶液S为溶液A,所述除去所述提取液1的杂质包括以下步骤:将所述提取液1进行离心,使DNA进入上清液中,收集上清液,将该上清液称为上清液A1,向所述上清液A1中加入所述溶液B反应3-5分钟,得到含有DNA的提取液,将该提取液称为提取液A2,除去所述提取液A2的杂质,得到DNA。

3.根据权利要求1或2所述的DNA提取方法,其特征在于:所述植物器官为种子,所述除去所述提取液A2的杂质包括以下步骤:将所述提取液A2进行离心,使DNA进入上清液中,收集上清液,将该上清液称为上清液A2,向所述上清液A2中加入所述异丙醇反应10秒,得到含有DNA的沉淀,将该沉淀称为沉淀A1,除去所述沉淀A1的杂质,得到DNA。

4.根据权利要求1-3中任一所述的DNA提取方法,其特征在于:所述植物器官为种子,所述除去所述沉淀A1的杂质包括以下步骤:用乙醇水溶液或乙醇洗涤所述沉淀A1得到DNA。

5.根据权利要求1所述的DNA提取方法,其特征在于:所述植物器官为叶,所述溶液S为溶液B,所述除去所述提取液1的杂质包括以下步骤:将所述提取液1进行离心,使DNA进入上清液中,收集上清液,将该上清液称为上清液B1,向所述上清液B1中加入所述异丙醇反应10秒,得到含有DNA的沉淀,将该沉淀称为沉淀B1,除去所述沉淀B1的杂质,得到DNA。

6.根据权利要求1或5所述的DNA提取方法,其特征在于:所述植物器官为叶,所述除去所述沉淀B1的杂质包括以下步骤:用乙醇水溶液或乙醇洗涤所述沉淀B1得到DNA。

7.根据权利要求1-6中任一所述的DNA提取方法,其特征在于:所述离心的温度为4℃,时间为10分钟。

8.根据权利要求1-7中任一所述的DNA提取方法,其特征在于:所述15-40分钟为15-30分钟或15-20分钟或15分钟。

9.根据权利要求1-8中任一所述的DNA提取方法,其特征在于:所述植物为双子叶植物或单子叶植物。

10.权利要求1-9中任一所述DNA提取方法在分子标记辅助育种中的应用,或权利要求1-9中任一所述DNA提取方法在品种纯度检测或品种的真实性鉴定中的应用。

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