[发明专利]一种植物DNA的快速提取方法有效
申请号: | 201410188782.6 | 申请日: | 2014-05-06 |
公开(公告)号: | CN103966198A | 公开(公告)日: | 2014-08-06 |
发明(设计)人: | 付小琼;叶武威;杨付新;王秀玲 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院棉花研究所 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12Q1/68 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅;任凤华 |
地址: | 455000 河*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 植物 dna 快速 提取 方法 | ||
1.植物DNA提取方法,包括下述步骤1)和2):
1)破碎植物器官和/或组织,得到植物粉末;
2)向所述植物粉末中加入细胞裂解液和溶液S在冰浴中反应15-40分钟,得到含有DNA的提取液,将该提取液称为提取液1,除去所述提取液1的杂质,得到DNA;
所述细胞裂解液由水和溶质组成,所述溶质及其浓度为0.1M Tris-HCl、0.02M EDTA钠盐、2%(质量百分含量)十六烷基三甲基溴化铵、2%(质量百分含量)聚乙烯吡咯烷酮、1.5M NaCl和1%(体积百分含量)β-巯基乙醇;
所述溶液S为溶液A或溶液B;
所述溶液A由苯酚、氯仿和异戊醇组成,所述溶液A中苯酚、氯仿和异戊醇的体积比为25:24:1;
所述溶液B由氯仿和异戊醇组成,所述溶液B中氯仿和异戊醇的体积比为24:1。
2.根据权利要求1所述的DNA提取方法,其特征在于:所述植物器官为种子,所述溶液S为溶液A,所述除去所述提取液1的杂质包括以下步骤:将所述提取液1进行离心,使DNA进入上清液中,收集上清液,将该上清液称为上清液A1,向所述上清液A1中加入所述溶液B反应3-5分钟,得到含有DNA的提取液,将该提取液称为提取液A2,除去所述提取液A2的杂质,得到DNA。
3.根据权利要求1或2所述的DNA提取方法,其特征在于:所述植物器官为种子,所述除去所述提取液A2的杂质包括以下步骤:将所述提取液A2进行离心,使DNA进入上清液中,收集上清液,将该上清液称为上清液A2,向所述上清液A2中加入所述异丙醇反应10秒,得到含有DNA的沉淀,将该沉淀称为沉淀A1,除去所述沉淀A1的杂质,得到DNA。
4.根据权利要求1-3中任一所述的DNA提取方法,其特征在于:所述植物器官为种子,所述除去所述沉淀A1的杂质包括以下步骤:用乙醇水溶液或乙醇洗涤所述沉淀A1得到DNA。
5.根据权利要求1所述的DNA提取方法,其特征在于:所述植物器官为叶,所述溶液S为溶液B,所述除去所述提取液1的杂质包括以下步骤:将所述提取液1进行离心,使DNA进入上清液中,收集上清液,将该上清液称为上清液B1,向所述上清液B1中加入所述异丙醇反应10秒,得到含有DNA的沉淀,将该沉淀称为沉淀B1,除去所述沉淀B1的杂质,得到DNA。
6.根据权利要求1或5所述的DNA提取方法,其特征在于:所述植物器官为叶,所述除去所述沉淀B1的杂质包括以下步骤:用乙醇水溶液或乙醇洗涤所述沉淀B1得到DNA。
7.根据权利要求1-6中任一所述的DNA提取方法,其特征在于:所述离心的温度为4℃,时间为10分钟。
8.根据权利要求1-7中任一所述的DNA提取方法,其特征在于:所述15-40分钟为15-30分钟或15-20分钟或15分钟。
9.根据权利要求1-8中任一所述的DNA提取方法,其特征在于:所述植物为双子叶植物或单子叶植物。
10.权利要求1-9中任一所述DNA提取方法在分子标记辅助育种中的应用,或权利要求1-9中任一所述DNA提取方法在品种纯度检测或品种的真实性鉴定中的应用。
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