[发明专利]以糖蜜为原料提取生物素的方法及检测方法

权利要求书

1.一种以糖蜜为原料提取生物素的方法，其特征在于：步骤如下：

(1)取糖蜜10～15g，加入100～150ml的80～95％乙醇溶液于烧杯中，在40KHz，功率为300～500W，温度60～70℃条件下超声处理20～30分钟；超声处理后，取出块状糖蜜，剩余乙醇溶液降温至5℃以下，过滤得残渣；将块状糖蜜与残渣合并，用100～150ml乙醇溶液冲洗过滤，得糖蜜渣块；

(2)将上述糖蜜渣块加入到100～150ml的95～100％的乙醇溶液中，在20KHz，300～500W，温度为55～65℃，间隔5秒超声3分钟设置下连续超声20～30分钟；超声处理后，趁热过滤，得滤液和滤渣，用55～65℃的95～100％乙醇溶液洗滤渣，得洗液和滤渣，合并滤液和洗液得乙醇滤液，滤渣加入N,N-二甲基甲酰胺，搅拌提取，过滤得DMF滤液；

(3)将乙醇滤液和DMF滤液合并，得生物素溶液。

2.一种生物素的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：步骤如下：

(1)取待检测样品液，点在硅胶板上，加入展开剂，在展开缸内展开，然后将薄层板拿出放在通风柜中晾干；同时，采用外标一点法点不同浓度的生物素标准品溶液，同时展开；

所述展开剂为二氯甲烷-氯仿-甲醇-冰乙酸混合液，其中，二氯甲烷、氯仿、甲醇、冰乙酸四者的体积比为1～3:1～3:1～2:0.04～0.06，优选3:3:2:0.06；

所述生物素标准品溶液包括浓度分别为0.05μg/μl，0.2μg/μl，0.25μg/μl，0.3μg/μl，0.4μg/μl的一系列标准品溶液；

(2)将2,4-二甲氨基肉桂醛、硫酸和无水乙醇混合，配成染色液，其中2,4-二甲氨基肉桂醛终浓度为0.1～0.2％，硫酸终浓度为1～2％；展完后晾干的展板，用染色液喷雾染色，得到与背景对比明显的标准品的斑点和样品的斑点；

(3)利用薄层扫描仪以530nm吸收波长进行薄层层析扫描，照射灯为钨灯，检测计算得到生物素标准品溶液质量和峰面积积分值的关系的回归方程，然后根据样品液的峰面积积分值计算出样品液中生物素的质量浓度。

3.根据权利要求2所述的生物素的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：所述硅胶板为涂有硅胶GF₂₅₄高效薄层板。

4.根据权利要求2所述的生物素的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：所述样品液是通过以下方法制备得到的：

(1)取糖蜜10～15g，加入100～150ml的80～95％乙醇溶液于烧杯中，在40KHz，功率为300～500W，温度60～70℃条件下超声处理20～30分钟；超声处理后，取出块状糖蜜，剩余乙醇溶液降温至5℃以下，过滤得残渣；将块状糖蜜与残渣合并，用100～150ml乙醇溶液冲洗过滤，得糖蜜渣块；

(2)将上述糖蜜渣块加入到100～150ml的95～100％的乙醇溶液中，在20KHz，300～500W，温度为55～65℃，间隔5秒超声3分钟设置下连续超声20～30分钟；超声处理后，趁热过滤，得滤液和滤渣，用55～65℃的95～100％乙醇溶液洗滤渣，得洗液和滤渣，合并滤液和洗液得乙醇滤液，滤渣加入N,N-二甲基甲酰胺，搅拌提取，过滤得DMF滤液；

(3)将乙醇滤液和DMF滤液合并，得生物素溶液，即为样品液。