[发明专利]野菊花UPLC指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.一种野菊花UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取野菊花药材，粉碎后精密称定，加入甲醇，称重后超声，过滤，取续滤液，即得供试品溶液，所述野菊花与甲醇的质量体积比为0.5:30-70(g/mL)；

(2)对照品溶液的制备：分别取绿原酸、木犀草苷、木犀草素和蒙花苷，精密称定，用体积分数为70-80％的甲醇溶液溶解，即得对照品溶液，所述绿原酸、木犀草苷、木犀草素、蒙花苷的浓度分别为5-20μg/mL、10-30μg/mL、2-10μg/mL和20-45μg/mL；

(3)野菊花UPLC指纹图谱的测定：用UPLC系统分别测定供试品溶液、对照品溶液，生成供试品溶液、对照品溶液的色谱图峰，以对照品溶液的色谱图峰为参照物，供试品溶液的色谱图峰与参照物比照得出相对保留时间与相对保留面积，生成野菊花UPLC指纹图谱；所述UPLC系统的条件为：

流速：0.3～0.5mL.min^-1；检测波长：220-380nm；柱温：20～40℃；线性梯度洗脱；流动相为：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.02％的磷酸水溶液；线性梯度洗脱的条件为：0→27min，流动相为5-15％乙腈→35-60％乙腈。

2.根据权利要求1所述的野菊花UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤(3)所述UPLC的条件为流速：0.4mL.min^-1；检测波长：360nm；柱温：30℃。

3.根据权利要求1所述的野菊花UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述线性梯度洗脱的条件为：0→27min，流动相为10％乙腈→37％乙腈。

4.根据权利要求1所述的野菊花UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述野菊花与甲醇的质量体积比为0.5:45-55(g/mL)。

5.根据权利要求1所述的野菊花UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤(2)所述所述绿原酸、木犀草苷、木犀草素、蒙花苷的浓度分别为10-15μg/mL、20-23μg/mL、4-6μg/mL和38-40μg/mL。

6.根据权利要求1-5任一项所述的野菊花UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取野菊花药材，粉碎后精密称定，加入甲醇，称重后超声，过滤，取续滤液，即得供试品溶液，所述野菊花与甲醇的质量体积比为0.5:50(g/mL)；

(2)对照品溶液的制备：分别取绿原酸、木犀草苷、木犀草素和蒙花苷，精密称定，用体积分数为70-80％的甲醇溶液溶解，即得对照品溶液，所述绿原酸、木犀草苷、木犀草素、蒙花苷的浓度分别为12、22.6、5.6和39.3μg/mL；

(3)野菊花UPLC指纹图谱的测定：用UPLC系统分别测定供试品溶液、对照品溶液，生成供试品溶液、对照品溶液的色谱图峰，以对照品溶液的色谱图峰为参照物，供试品溶液的色谱图峰与参照物比照得出相对保留时间与相对保留面积，生成野菊花UPLC指纹图谱；所述UPLC系统的条件为：

流速：0.4mL.min^-1；检测波长：360nm；柱温：30℃；线性梯度洗脱；流动相为：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.02％的磷酸水溶液；线性梯度洗脱的条件为：0→27min，流动相为10％乙腈→37％乙腈。

7.根据权利要求1～5任一项所述的野菊花UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述的过滤使用微孔滤膜，所述微孔滤膜的尺寸为0.2-0.25μm。

8.根据权利要求1～5任一项所述的野菊花UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述超声的条件为功率150-170W，频率55-60kHz。