[发明专利]野菊花UPLC指纹图谱的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及指纹图谱的构建领域，特别是涉及一种野菊花UPLC指纹图谱的构建方法。

背景技术

目前，中草药在中医治疗领域中发挥着巨大的作用，而中草药特别是一些中药颗粒在服用过程中即为方便。而野菊花为菊科多年生草本植物野菊的头状花序，外形与菊花相似，野生于山坡草地、田边路旁。以色黄无梗、完整、气香、花未全开者为佳。野菊花含可广泛用于治疗疔疮痈肿、咽喉肿痛、风火赤眼、头痛眩晕等病症，同时又有很好的降压作用，可用于高血压病的辅助治疗,但是野菊花的质量标准控制却参差不齐。指纹图谱是作为控制中药质量均一性和稳定性的检测手段，但目前传统的野菊花药材HPLC指纹图谱检测所需时间太长，所需样品量较大，检测的精度及灵敏度不高。

发明内容

基于此，有必要提供一种灵敏度高、稳定性好的野菊花UPLC指纹图谱的构建方法。

一种野菊花UPLC指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取野菊花药材，粉碎后精密称定，加入甲醇，称重后超声，过滤，取续滤液，即得供试品溶液，所述野菊花与甲醇的质量体积比为0.5:30-70(g/mL)；

(2)对照品溶液的制备：分别取绿原酸、木犀草苷、木犀草素和蒙花苷，精密称定，用体积分数为70-80％的甲醇溶液溶解，即得对照品溶液，所述绿原酸、木犀草苷、木犀草素、蒙花苷的浓度分别为5-20μg/mL、10-30μg/mL、2-10μg/mL和20-45μg/mL；

(3)野菊花UPLC指纹图谱的测定：用UPLC系统分别测定供试品溶液、对照品溶液，生成供试品溶液、对照品溶液的色谱图峰，以对照品溶液的色谱图峰为参照物，供试品溶液的色谱图峰与参照物比照得出相对保留时间与相对保留面积，生成野菊花UPLC指纹图谱；所述UPLC系统的条件为：

流速：0.3～0.5mL.min^-1；检测波长：220-380nm；柱温：20～40℃；线性梯度洗脱；流动相为：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.02％的磷酸水溶液；线性梯度洗脱的条件为：0→27min，流动相为8-12％乙腈→35-40％乙腈。

在其中一个实施例中，步骤(3)所述UPLC的条件为流速：0.4mL.min^-1；检测波长：360nm；柱温：30℃。

在其中一个实施例中，所述线性梯度洗脱的条件为：0→27min，流动相为10％乙腈→37％乙腈。

在其中一个实施例中，步骤(1)所述野菊花与甲醇的质量体积比为0.5:45-55(g/mL)。

在其中一个实施例中，步骤(2)所述所述绿原酸、木犀草苷、木犀草素、蒙花苷的浓度分别为10-15μg/mL、20-23μg/mL、4-6μg/mL和38-40μg/mL。

在其中一个实施例中，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取野菊花药材，粉碎后精密称定，加入甲醇，称重后超声，过滤，取续滤液，即得供试品溶液，所述野菊花与甲醇的质量体积比为0.5:50(g/mL)；

(2)对照品溶液的制备：分别取绿原酸、木犀草苷、木犀草素和蒙花苷，精密称定，用体积分数为70-80％的甲醇溶液溶解，即得对照品溶液，所述绿原酸、木犀草苷、木犀草素、蒙花苷的浓度分别为12、22.6、5.6和39.3μg/mL；

(3)野菊花UPLC指纹图谱的测定：用UPLC系统分别测定供试品溶液、对照品溶液，生成供试品溶液、对照品溶液的色谱图峰，以对照品溶液的色谱图峰为参照物，供试品溶液的色谱图峰与参照物比照得出相对保留时间与相对保留面积，生成野菊花UPLC指纹图谱；所述UPLC系统的条件为：

流速：0.4mL.min^-1；检测波长：360nm；柱温：30℃；线性梯度洗脱；流动相为：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.02％的磷酸水溶液；线性梯度洗脱的条件为：0→27min，流动相为10％乙腈→37％乙腈。

在其中一个实施例中，步骤(1)所述的过滤使用微孔滤膜，所述微孔滤膜的尺寸为0.2-0.25μm。

在其中一个实施例中，步骤(1)所述超声的条件为功率150-170W，频率55-60kHz。

本发明涉及的一种野菊花UPLC指纹图谱的构建方法具有以下有益效果：