[发明专利]一种试剂及其在硫化氢检测中的应用

权利要求书

1.一种试剂，它是5-曡氮荧光素醌，其特征在于结构式为：

2.如权利要求1所述的一种试剂的合成方法，其特征在于步骤为：将5-氨基荧光素溶解在体积比2:1的醋酸和H₂O的混合溶液中，冷却到0℃，然后加入NaNO₂搅拌15分钟，再加入NaN₃，在0℃反应1小时，升温到室温再反应1小时，悬浮液真空抽滤，固体用盐酸和水洗涤，真空干燥后，得到黄色的5-曡氮荧光素醌固体；5-氨基荧光素、NaNO₂和NaN₃的摩尔比1:1.5:1.5。

3.一种检测硫化氢的方法：其特征在于，步骤为：

(1)、配制pH＝7.4、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，配制2mM的5-曡氮荧光素醌的乙腈溶液；

(2)、按体积比1000:1000:1，将HEPES缓冲溶液、乙腈溶液和5-曡氮荧光素醌的乙腈溶液加到干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入,531nm的荧光强度逐渐增强；

(3)、用蒸馏水配制2mM的硫化氢溶液；把1mL的HEPES缓冲溶液、1mL的乙腈溶液1μL的5-曡氮荧光素醌乙腈溶液加到另一个荧光比色皿中，分别在加入硫化氢溶液的体积为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0μL时，在荧光分光光度仪上测定531nm对应的荧光强度F为95、175、273、382、467、539、643、717、802、883，以硫化氢浓度为横坐标，以相对荧光强度F－F₀为纵坐标绘制图，F₀﹦17，得到硫化氢浓度的工作曲线；线性回归方程为：F－F₀＝-3.14+440c，c的单位为μM；

(4)、将HEPES缓冲溶液1000uL、乙腈溶液1000μL和5-曡氮荧光素醌乙腈溶液1uL加到干净的荧光比色皿中，用微量进样器吸取VμL待测样品溶液，加入到此干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，将测得的荧光强度代入(3)的线性回归方程，得到浓度c，待测样品C_待测样＝(2000+V_待测样)μL×c×10^-6/VμL,即可求得硫化氢的浓度。