[发明专利]一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法及应用

权利要求书

1.一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)将嗜酸乳杆菌冻干菌粉接种于MRS肉汤中，在37℃培养条件下MRS活化三次，前两次以3～5％的接种量转接，并在37℃的条件下培养22～24h，第三次按照2～3％的接种量转接，并在37℃的条件下培养18h，后进行离心处理并收集菌体，弃去上清液得菌泥，将菌泥与浓度为0.85～0.9％的无菌生理盐水混合配制成2.0～3.0×10⁹CFU/mL的菌悬液备用；

2)取浓度为0.5～1.1％和0.1％的黄原胶溶液，灭菌和离心除气处理后备用；

3)取浓度为0.5～1％壳聚糖溶液，调节pH至5～6备用；

4)将步骤1)制备的菌悬液和步骤2)制备浓度为0.5～1.1％的黄原胶溶液按照1:(5～20)的质量比例混合得到嗜酸乳杆菌菌胶液，将嗜酸乳杆菌菌胶液加入磁力搅拌器上的步骤3)制备的壳聚糖溶液中，菌胶液与壳聚糖比例为1:(3～6)，加入后搅拌，获得微胶囊；

5)待微胶囊完全交联后过滤，将过滤后的微胶囊与步骤2)制备的0.1％的黄原胶溶液以1g:(20～40mL)混合搅拌，后将微胶囊过滤，并洗涤，最终得到双层的嗜酸乳杆菌微胶囊，微胶囊的活菌数为2.0～3.5×10¹⁰CFU/g。

2.根据权利要求1所述的一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法，其特征在于：所述的步骤1)中离心时的转速为7000～10000r/min，离心时间为10～15min。

3.根据权利要求1所述的一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法，其特征在于：所述的步骤2)中灭菌处理的温度为：80～110℃，时间为10～15min；离心除气处理的转速为：5000～7000r/min，时间为10～15min。

4.根据权利要求1所述的一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法，其特征在于：所述的步骤3)中，调节pH值时使用的试剂为浓度为1N的NaOH溶液。

5.根据权利要求1所述的一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法，其特征在于：所述的步骤4)中，将嗜酸乳杆菌菌胶液加入磁力搅拌器上的壳聚糖溶液中的方式为：使用针头规格为0.45～0.7mm的无菌注射器将嗜酸乳杆菌菌胶液以一滴一滴地方式挤压入磁力搅拌器上的壳聚糖溶液中；且搅拌时间为30～60min。

6.根据权利要求1所述的一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法，其特征在于：所述的步骤5)中，过滤时均使用160～200目的纱布过滤；洗涤时使用生理盐水洗涤若干次；搅拌时间为20～40min。

7.一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的应用，其特征在于：在酸奶中，以0.1％～1％(w/w)的加入量将制备的嗜酸乳杆菌微胶囊加入，获得含益生菌微胶囊的液态酸奶。