[发明专利]一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于益生菌制品制备技术领域，具体涉及一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法及应用。

背景技术

嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)是乳酸菌家族中的一种重要的有益菌，是人体肠道中的重要微生物。它能调节人体肠道微生物菌群的平衡，增强机体免疫力，降低胆固醇水平，缓解乳糖不耐症以及抑制肿瘤细胞的形成，对人体健康特别是对维持胃肠道正常生理功能具有重要作用。但其对环境因素(氧、水分和高温)、机械挤压、热激以及胃酸等都非常敏感。

微胶囊技术具有防止外界环境因素破坏芯材、有效地控制芯材的释放、掩盖芯材的异味、改变芯材的物理和化学性质，使其便于贮藏和运输等作用。可利用微胶囊及技术对益生菌进行双层包埋，以便对益生菌起到更强的保护作用。

目前，利用微胶囊包埋技术保护嗜酸乳杆菌的报道很多，大多数都是利用海藻酸盐等材料作为包埋壁材对菌体进行单层或双层包埋。例如，CN1969889A中公开了一种益生菌的微胶囊，该微胶囊是以海藻酸钠和氯化钙为壁材进行单层包埋，然后用壳聚糖在海藻酸钙上进行二次包被；文献“双层包埋制备嗜酸乳杆菌微胶囊及其应用”中提到，将多孔淀粉作为内壁材，包埋嗜酸乳杆菌，再采用海藻酸钠为外壁材，经复凝聚法制得双层包埋的益生菌微胶囊；CN1884513A中也公开一种双层嗜酸乳杆菌微胶囊的制备方法，该微胶囊用变性淀粉、阿拉伯胶、聚乙二醇、海藻酸钠、壳聚糖、氯化钙构成的壁材进行双层包埋；文献“利用双层包埋剂包埋乳酸菌”公开的嗜酸乳杆菌双层包埋方法中，以牛奶蛋白作为内层包埋剂，κ–卡拉胶和刺槐豆胶为外层包埋剂；CN102210450A中提到，先将嗜酸乳杆菌与果胶、海藻酸钠的混合胶体混合，之后与氯化钙进行钙化，最后在壳聚糖中进行成膜反应，得到双层包埋的嗜酸乳杆菌微胶囊。

除以上提到的包埋材料之外，还可以利用壳聚糖与黄原胶的聚电解质络合作用形成的共混凝胶先对嗜酸乳杆菌进行包埋，再在黄原胶中进行二次成膜，得到双层包埋的嗜酸乳杆菌微胶囊。此法得到的益生菌微胶囊可应用与果粒橙等液态饮料中，开发出新型的液态食品。壳聚糖和和黄原胶都是天然的生物大分子，生物相容性好，无毒副作用。壳聚糖溶于酸性水溶液中带正电荷，可与带负电荷的阴离子多糖黄原胶通过聚电解质络合作用形成共凝胶，从而作为包埋壁材使用。目前还没有利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶嗜酸乳杆菌微胶囊的制备和应用的发明专利，为此，提供一种黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊及应用的方法是很有必要的。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术中存在的缺点，提供一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法及应用，具有能够提高菌体的包埋产率以及包埋活菌数的优点。

为实现上述目的，一种利用黄原胶∕壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法，包括以下步骤：

1)将嗜酸乳杆菌冻干菌粉接种于MRS肉汤中，在37℃培养条件下MRS活化三次，前两次以3～5％的接种量转接，并在37℃的条件下培养22～24h，第三次按照2～3％的接种量转接，并在37℃的条件下培养18h，后进行离心处理并收集菌体，弃去上清液得菌泥，将菌泥与浓度为0.85～0.9％的无菌生理盐水混合配制成2.0～3.0×10⁹CFU/mL的菌悬液备用；

2)取浓度为0.5～1.1％和0.1％的黄原胶溶液，灭菌和离心除气处理后备用；

3)取浓度为0.5～1％壳聚糖溶液，调节pH至5～6备用；

4)将步骤1)制备的菌悬液和步骤2)制备的浓度为0.5～1.1％黄原胶溶液按照1:(5～20)的质量比例混合得到嗜酸乳杆菌菌胶液，将嗜酸乳杆菌菌胶液加入磁力搅拌器上的步骤3)制备的壳聚糖溶液中，菌胶液与壳聚糖比例为1:(3～6)，加入后搅拌，获得微胶囊；

5)待微胶囊完全交联后过滤，将过滤后的微胶囊与步骤2)制备的0.1％的黄原胶溶液以1g:(20～40mL)混合搅拌，后将微胶囊过滤，并洗涤，最终得到双层的嗜酸乳杆菌微胶囊，微胶囊的活菌数为2.0～3.5×10¹⁰CFU/g。

所述的步骤1)中离心时的转速为7000～10000r/min，离心时间为10～15min。

所述的步骤2)中灭菌处理的温度为：80～110℃，时间为10～15min；离心除气处理的转速为：5000～7000r/min，时间为10～15min。

所述的步骤3)中，调节pH值时使用的试剂为浓度为1N的NaOH溶液。